图1 GST Pull-down验证蛋白互作原理图。 操作步骤: 样品处理—GST/His-诱饵蛋白原核表达载体构建—GST融合蛋白表达—GST融合蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS 二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻...
跟着nature学习|coip和pull.看文献的时候总是看到,需要证明两个蛋白互作,有人用CoIP有人用Pull down,有人两个都用那么,pull down和Coip的区别是什么呢❓️ 图怎么看呢❓️ 💕co-ip怎么看💕pu - poppy(读博版)于20240603发布在抖音,已经收获了854个喜欢
(图8 RIP流程示意图[16]) 7 下拉实验(pull-down Assay) pull-down实验是验证体外蛋白互作的主要实验手段,也是验证无成熟抗体(IP级别)的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST/HIS/MBP等(GST、HIS、MBP是最常用的标签),此处以GST(Glutathione S-transferase)为例,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“...
GST Pull-Down原理图 CoIP原理 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗体和蛋白的特异性亲和作用,通过捕获与蛋白或抗原特异性结合的抗体,进而从复杂的样品中捕获及富集目标蛋白,同时可以测定与之相互作用的蛋白或其它生物大分子。 CoIP原理图 当无法进行体内互作检测或无法获得在体样本或者在体样本没有特异性一抗可以使用但是...
DNA Pull-down原理 将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，形成磁珠-DNA探针复合体，再与细胞核蛋白孵育，这可以将与DNA结合的蛋白吸附在磁珠上。洗涤去除未结合及非特异性结合蛋白分子后，将与DNA结合的蛋白洗脱下来，得到DNA Pull-down产物，通过Western-blot可以检测DNA与已知蛋白的互作。图 DNA Pull-down...
观察曲线特征。pulldown跑胶图通常包括两个特征曲线，分别是载荷-位移曲线和应力-应变曲线，其中，载荷-位移曲线表示施加载荷时位移的变化情况，应力-应变曲线表示所受应力与应变之间的关系，观察这两条曲线的变化趋势和特点，可以了解样品受力时的性能和特性。
Pull-down验证蛋白互作原理图 实验步骤: 1、构建载体 在进行载体构建时,通常会用常见的蛋白质标签,如GST(谷胱甘肽S-转移酶)、HIS(组氨酸富集标签)、MBP(麦芽糖结合蛋白)等。这些标签对应着多种载体,常见的有PET系列(如pET-28a)和PGEX系列载体(如pGEX-4T1)。
DNA pull down原理示意图如下所示: 2. DNA pull down的技术流程 体外合成生物素标记的DNA片段→提取核蛋白(或总蛋白)→孵育→洗涤、洗脱互作蛋白→WB检测或质谱鉴定。 3. 适用范围 动物、细胞、植物组织、原生质体均可。 4. 客户提供 ① 启动子序列(200-500bp为宜) ...
(图8 RIP流程示意图[16]) 7 下拉实验(pull-down Assay) pull-down实验是验证体外蛋白互作的主要实验手段,也是验证无成熟抗体(IP级别)的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST/HIS/MBP等(GST、HIS、MBP是最常用的标签),此处以GST(Glutathione S-transferase)为例,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“...
而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式，如下图所示：Pull-Down与蛋白纯化实验的对比：运用重组基因表达蛋白，再进行下游的蛋白的提取和纯化实验：两种实验步骤的异同点解析：需要实验到的产品类型：GST 标签蛋白纯化——PurKine™ 谷胱甘肽S转移酶标签 谷胱甘肽树脂MBP 标签蛋白纯化——PurKine™ 麦芽糖结合蛋白标签...