此外,通过使用抗AIB1和抗NICD抗体的Co-IP分析,也可以在CT26细胞中检测到内源性AIB1和NICD的相互作用(图B)。 为了确定AIB1是否可以直接与NICD结合,将大肠杆菌产生的GST-NICD蛋白与基于大肠杆菌提取物的无细胞蛋白质合成系统产生的AIB1蛋白孵育,进行GST pull down检测是否直接互作。 结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GS...
Co-IP和GST pull-down实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的。不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围及实验难度上均有差异。 Co-IP:反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行CoIP检测时,样本一般...
1.抗体选择：CO-IP需要特异性的抗体，而Pull Down需要选择合适的亲和标记。抗体的选择和亲和标记的引入都可能对蛋白质的结构和功能产生影响，需要谨慎考虑。2.操作复杂度：CO-IP操作相对复杂，需要多个步骤和较长的时间；而Pull Down操作相对简单，时间较短，适用于高通量实验。3.结果解读：CO-IP可以保留蛋白质的天...
综合⽽⾔，GST pull-down实验和CoIP实验其实是相互补充的两种实验⽅法，通过⼆者结合，我们才能更准确地了解两个蛋⽩之间的真实互作情况。对于很多⽂献中CoIP和GST pull-down实验结果图，许多刚踏⼊科研领域的⼩伙伴可能不是很 熟悉，看不⼤明⽩。今天咱们就根据⽂献案例来具体展⽰⼀下两种实验...
3.结果解读:CO-IP可以保留蛋白质的天然结构和相互作用,有助于鉴定蛋白质的结构;而Pull Down可能会引入亲和标记对蛋白质的结构和功能产生影响,需要谨慎解读结果。 CO-IP和Pull Down是两种常用的方法,用于解析蛋白质的结构。CO-IP可以保留蛋白质的天然结构和相互作用,适用于鉴定蛋白质的结构;而Pull Down操作相对简单...
图1 Co-IP 原理示意图 GSTpull-down: GST,全称glutathione-S-transferase,即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,能够和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)稳定结合,将GSH与琼脂糖珠/磁珠交联可得GSH琼脂糖珠/磁珠。 该实验中使用带有 GST 标签的诱饵蛋白,可以结合到 GSH 琼脂糖珠/磁珠上。当体系中存在能够与诱饵蛋白相互作用的目的蛋白...
coip实验和 gst pull-down实验 。其中fig.2c的coip实验结果如下: 要想看懂上面这个coip实验结果图,我们首先需要了解以下几个关键术语: ip: immunoprecipitation,代表免疫沉淀,富集目的蛋白; ib: immunoblotting,免疫印迹,即western blotting ,显示目的蛋...
3.结果解读:CO-IP可以保留蛋白质的天然结构和相互作用,有助于鉴定蛋白质的结构;而Pull Down可能会引入亲和标记对蛋白质的结构和功能产生影响,需要谨慎解读结果。 CO-IP和Pull Down是两种常用的方法,用于解析蛋白质的结构。CO-IP可以保留蛋白质的天然结构和相互作用,适用于鉴定蛋白质的结构;而Pull Down操作相对简单...
可以看见GST pull-down实验结果图,与CoIP实验非常类似,主要也分为两部分: Input部分检测未经过GST pull-down处理的样本,也是一种阳性对照。Input部分有三张WB结果: GAPDH代表以GAPDH抗体(anti-GAPDH)检测样本中GAPDH蛋白水平(GAPDH和Tubulin一样,都是常用的内参蛋白),表明四个样本蛋白水平一致; ...
Pull-Down 质谱是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术。它利用蛋白质的亲和标签(如 His 标签)来捕获目标蛋白质及其相互作用的蛋白质。这些蛋白质然后可以通过质谱进行鉴定。Pull-Down 质谱比 Co-IP 更直接,因为它不依赖于抗体的可用性和特异性,但可能会捕获到比 Co-IP 更多的非特异性相互作用。