该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验,His-Pelo 则作为目的蛋白; 此时Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体和 Anti-His 抗体对 Pull-down 处理后的样本进行 WB 检测,条带4处的空白表示 GST 不会与 His-Pelo 结合,而条带3、11则表示沉淀中同时存在 GST-Pnsll 和 His-Pelo,说明...
Co-IP和GST pull-down实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的。不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围及实验难度上均有差异。 Co-IP:反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行CoIP检测时,样本一般...
由于Pull-down实验条件是体外状态而非体内自然状态，无法得知体内真实的蛋白结合情况，因而可能会使实验结果出现假阳性，例如可能是因为电荷作用的影响造成的吸附而不是生理性的相互作用。同时，Pull-down也可以对Co-IP实验鉴定到的蛋白相互作用关系做进一步验证。若将Co-IP/Pull-down技术与以LC-MS为基础的蛋白质组学...
综合而言,GST pull-down实验和Co-IP实验其实是相互补充的两种实验方法:GST pull-down验证蛋白是不是直接相互作用,Co-IP验证蛋白的互作情况。通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 2、GST pull-down基本概念 利用重组技术将探针蛋白与GST谷胱苷肽巯基转移酶融合,融合蛋白通过GST与固相化在...
蛋白互作验证:CO-IP or GST Pull down #蛋白互作 #sci实验 #分子生物实验 #科研 #实验发文 - SCI 科研助手于20240903发布在抖音,已经收获了8.4万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
图1 Co-IP 原理示意图 GST pull-down: GST,全称glutathione-S-transferase,即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,能够和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)稳定结合,将GSH与琼脂糖珠/磁珠交联可得GSH琼脂糖珠/磁珠。 该实验中使用带有 GST 标签的诱饵蛋白,可以结合到 GSH 琼脂糖珠/磁珠上。当体系中存在能够与诱饵蛋白相互作用的目的蛋...
Pull-down实验用于检测两种蛋白质在体外条件下是否能够直接结合。其主要应用包括:①验证已知蛋白质相互作用:通过使用一个已知蛋白质作为诱饵,可以验证它与另一个蛋白质的潜在相互作用。筛选新的蛋白质相互作用:当与细胞裂解液或蛋白质混合物孵育时,Pull-down可以用来发现与诱饵蛋白相互作用的未知蛋白质。Pull-down技术的...
不同之处在于Pull-down利用1个纯化且含有标签的蛋白作为诱饵来结合互作蛋白, 通常用来证明蛋白之间直接的相互作用; Co-IP则采用固定的抗体捕获互作蛋白, 用来证明2个蛋白之间的相互作用, 但是不排除通过第3个蛋白介导的间接互作。下面我们将详细介绍GST标签融合蛋白的Pull-down和烟草瞬时表达系统中Co-IP两种技术的实验...
不同之处在于Pull-down利用1个纯化且含有标签的蛋白作为诱饵来结合互作蛋白, 通常用来证明蛋白之间直接的相互作用; Co-IP则采用固定的抗体捕获互作蛋白, 用来证明2个蛋白之间的相互作用, 但是不排除通过第3个蛋白介导的间接互作。下面我...
gst pull-down实验 。其中fig.2c的coip实验结果如下: 要想看懂上面这个coip实验结果图,我们首先需要了解以下几个关键术语: ip: immunoprecipitation,代表免疫沉淀,富集目的蛋白; ib: immunoblotting,免疫印迹,即western blotting ,显示目的蛋白; input:...