CO-IP和Pull Down方法是常用的蛋白质相互作用研究方法，各自具有优劣势和适用范围。选择合适的方法取决于研究的目的和需求。在实际应用中，可以根据具体情况选择使用CO-IP或Pull Down方法，或者结合两种方法的优势进行综合分析，以获得更全面的蛋白质相互作用信息。Pull Down方法则更适用于筛选潜在的相互作用伙伴，发现新...
验证蛋白质间相互作用的 Co-IP 检测; 验证蛋白质间相互作用的 GST Pull-down 检测。
而Pull Down方法则通过亲和剂选择性地富集目标蛋白及其相互作用的蛋白,特异性相对较低。 2.操作难度:CO-IP方法需要特异性抗体的可用性和抗体的亲和力等因素,操作相对较为复杂。而Pull Down方法则操作简单、快速,不需要特异性抗体。 3.应用范围:CO-IP方法适用于研究特定蛋白质相互作用的细节,如蛋白质复合物的组成和...
1.抗体选择：CO-IP需要特异性的抗体，而Pull Down需要选择合适的亲和标记。抗体的选择和亲和标记的引入都可能对蛋白质的结构和功能产生影响，需要谨慎考虑。2.操作复杂度：CO-IP操作相对复杂，需要多个步骤和较长的时间；而Pull Down操作相对简单，时间较短，适用于高通量实验。3.结果解读：CO-IP可以保留蛋白质的天...
由于Pull-down实验条件是体外状态而非体内自然状态，无法得知体内真实的蛋白结合情况，因而可能会使实验结果出现假阳性，例如可能是因为电荷作用的影响造成的吸附而不是生理性的相互作用。同时，Pull-down也可以对Co-IP实验鉴定到的蛋白相互作用关系做进一步验证。若将Co-IP/Pull-down技术与以LC-MS为基础的蛋白质组学...
一、Co-IP/GST pull-down原理 Co-IP 基本原理 用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白(诱饵蛋白)结合,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测是否存在与诱饵蛋白相结合的目的蛋白。 Co-IP完整的实验流程可看以下文章:
co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作,反应地是比较真实的蛋白质之间的相互作用,而pull down则是通过体外实验,无法得知体内真实的结合情况。co-IP由于沉淀下来的是蛋白复合物,所以不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的,而pull down可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。
免疫共沉淀（Co-IP）和下拉法（Pull-down）是用于确定稳定的蛋白与蛋白相互作用的分析方法。免疫共沉淀（Co-IP）：免疫共沉淀在体外检测两种蛋白质之间特定相互作用的存在。Co-IP的原理是当细胞在非变性条件下裂解时，许多细胞内蛋白互作被保留下来。如果蛋白X由一个抗体免疫沉淀下来，与蛋白X结合的蛋白Y也可以被...
Pull-down与Co-IP的原理类似, 均是利用亲和配体捕获互作蛋白。不同之处在于Pull-down利用1个纯化且含有标签的蛋白作为诱饵来结合互作蛋白, 通常用来证明蛋白之间直接的相互作用; Co-IP则采用固定的抗体捕获互作蛋白, 用来证明2个蛋白之间的相互作用, 但是不排除通过第3个蛋白介导的间接互作。下面我们将详细介绍GST标...
Pull-Down 质谱是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术。它利用蛋白质的亲和标签(如 His 标签)来捕获目标蛋白质及其相互作用的蛋白质。这些蛋白质然后可以通过质谱进行鉴定。Pull-Down 质谱比 Co-IP 更直接,因为它不依赖于抗体的可用性和特异性,但可能会捕获到比 Co-IP 更多的非特异性相互作用。