PRRSV N 蛋白分子量大小为15KD,为非糖基化蛋白,保守性好在病毒中的含量较高,具有极高的免疫原性。千寻生物技术团队利用原核表达的N蛋白免疫BALB/C小鼠成功制备了若干株单克隆抗体,适用于间接免疫荧光和wb实验。 PRRSV N蛋白单抗间接免疫荧光鉴定 PRRSV N蛋白单抗与病毒WB反应鉴定...
图5为本发明实施例提供的以抗欧洲型prrsv-n蛋白兔血清为检测抗体进行his融合n蛋白的westernblot分析结果图,其中,m为170kda的蛋白marker,1为pet-32a-prrsv-orf7重组n蛋白,2为阴性对照; 图6为本发明实施例提供的以抗his鼠单克隆抗体为检测抗体进行his融合n蛋白的westernblot分析结果图,其中,m为170kda的蛋白marker,1...
电泳检测和Western blotting分析表达产物的特性.结果:SDS—PAGE电泳检测和Western blotting分析结果表明,表达的蛋白大小约为19kDa,符合预期结果,并能与抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,说明表达的蛋白具有良好的免疫原性,可应用于临床PRRSV抗体的检测.结论:在大肠杆菌表达系统内成功表达了 PRRSV核衣壳蛋白(N蛋白...
将构建好的表达质粒pET—E和pET—N转化到大肠杆菌BL-21中,通过诱导剂IPTG的诱导,在原核表达系统中得到了高效表达,重组蛋白的分子量分别为39KDa和31KDa左右.通过Western—blot蛋白免疫印记法检测蛋白活性,发现两种原核表达重组蛋白均能与PRRSV阳性血清发生反应,具有生物学活性,这就为下一步目的蛋白的纯化,蛋白高级结构...
PRRSV的基因组RNA大小为15 kb,具有5'端帽子结构和3'端Poly(A)尾巴结构。该病毒的主要结构蛋白为GP2a、GP3、GP4、GP5、M、E(GP2b)、N(图1),其中GP5和M蛋白是PRRSV的主要囊膜蛋白,它们的总含量占病毒蛋白的一半以上,在病毒粒子...
并且与采用蔗糖密度梯度离心法纯化的prrsv形态一致,粒子呈圆形或者椭圆形,具有双层膜结构,直径大小在40nm-100nm,采用抗prrsvm蛋白的兔血清进行免疫电镜观察,结果显示myc和his双标记型vlps与天然病毒一样都能够被金颗粒标记,这表明n蛋白的表达不影响标记型vlps的组装,以vlps作为包被抗原进行间接elisa检测,结果显示标记型...
阻断ELISA试验显示1H4 MAb与病毒的结合能够被PRRSV阳性血清阻断.Western blot试验显示1H4 MAb可以特异性识别PRRSV的N蛋白,经截短表达N蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为N蛋白末端aa 107～aa 123.该抗原表位在美洲型PRRSV中高度保守,该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRRSV阻断ELISA检测方法奠...
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白7α(NSP7α)三维结构的解析和其功能的初步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)是一种正链单股RNA病毒,它引起的猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是全世界养猪产业中最有危害性的疾病之一。研究表明PRR...
N蛋白是由相对保守的PRRSVORF7编码的核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein),在保护病毒RNA及病毒复制、转录和病毒粒子的装配过程中发挥重要作用。早期研究表明N蛋白是PRRSV感染过程中产生最多的结构蛋白,可以在感染早期诱发机体产生大量特异性抗体。同时也有研究发现使用杆状病毒表达的N蛋白作为亚单位疫苗免疫宿主后,可对PRRSV...