诱导分化操作精细把控。取对数生长期 THP - 1 细胞,计数后按 1×10⁶个 /mL 密度接种至培养器皿,像 6 孔板、24 孔板等依实验规模选定。加入 PMA 使其终浓度达 20 - 100 ng/mL(常选 50 ng/mL),轻柔摇匀确保均匀分布。随即放回培养箱,24 - 48 小时是关键观察期。期间,细胞形态渐变,由悬浮的圆形单...
首先,我们需要在6孔板里铺细胞。具体来说,每孔加入200万细胞(贴壁后细胞密度大概80%-90%),然后加入80ng/mL的PMA(这个PMA是MCE的HY-18739,用DMSO溶解)。最后,每孔再加2mL完全培养基,然后诱导24小时。 镜下观察 🔬 24小时后,你可以在显微镜下看看细胞状态。你会发现细胞几乎全都贴壁了,有些还成了梭形,胞...
（3）接种细胞：收集THP-1细胞并进行计数，用诱导培养基重悬细胞沉淀调整细胞密度为5*10^5/mL，将细胞...
将THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后，可用RPMI-1640培养基配制氧化修饰低密度脂蛋白OX-LDL，使其终浓度...
2.人单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)的诱导分化 (1)采血后,首先用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC(400g,25min),然后再用Percoll(400g,15min)分离PBMC,最后将单核细胞以5×10E5/ml的浓度接种在含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中,同时加入20 nM的CSF-1。 (2)单个核细胞在37...
方法 首先用 PMA梯度剂量(0,25,50,100,200,400ng/ml)作用于 THP 1细胞 24h,通过 CCK 8法检测细胞活力,再分别采用 0,10,50ng/mlPMA体外刺激 THP 1细胞 24h、48h,流式细胞术检测细胞表面标志物 CD11b、CD14。 结果 梯度 PMA剂量(0-100ng/ml)对细胞活力没有影响(P>005)。10ng/ml、50ng/mlPMA处理...
THP-1细胞的极化及鉴定过程如下：将细胞用RPMI 1640完全培养基重悬，加入终浓度为100ng/ml的PMA进行24h诱导分化。随后，将细胞分为两组进行极化：一组加入10ng/ml的LPS和20ng/ml的人类IFN-γ，另一组加入20ng/ml的人类IL-4和20ng/ml的人类IL-13。通过qRT-PCR、ELISA、流式细胞术等方法对细胞...
虽然是目前比较通用的巨噬细胞模型,但既往文献关于PMA诱导THP-1模型中,不同PMA诱导条件对细胞表面标志物CD11b、CD14表达等尚无系统的比较研究。基于此,本研究拟对不同浓度PMA作用THP-1细胞后,其CD11b、CD14的表达进行分析,初步考察了PMA诱导THP-1细胞分化的条件,为后续相关实验提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 ...
首先，准备工作至关重要。确保实验所用的 THP-1 细胞处于良好的生长状态，细胞活性高且无污染。准备适量的 PMA 储备液，一般将 PMA 溶解在 DMSO（二甲基亚砜）中配制成高浓度储备液，以便后续使用。接着进行诱导过程。将 THP-1 细胞接种在合适的培养容器中，如培养瓶或培养板。根据细胞密度和实验需求，加入适量的...
2 PMA诱导分化:待THP-1细胞生长至对数生长期时,收集细胞并以1×10^6细胞/mL的浓度重悬于新的培养基中。加入PMA至终浓度为100 nM,轻轻混匀后放回培养箱继续培养。 3 流式细胞术抗体标记:在PMA诱导分化后的特定时间点(如24小时、48小时、72小时),收集细胞并以预冷的PBS洗涤两次。随后,按照抗体说明书推荐的浓...