(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成...
离心洗涤细胞并弃去上清液。 重复上一步洗涤细胞。 用500ul PBS重悬细胞,上机检测。 4、结果处理: 不加阻断剂的样本,胞外CD69表达为90%以上 加阻断剂的样本,胞内CD69表达为90%以上,则选择此时的刺激剂浓度作为最佳浓度。 5、Th1/Th2/Th17检测步骤,请参照胞内CD69的染色,即把CD69抗体换成同型对照或者相应的...
(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成...
(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA...
离心洗涤细胞并弃去上清液。 重复上一步洗涤细胞。 用500ul PBS重悬细胞,上机检测。 4、结果处理: 不加阻断剂的样本,胞外CD69表达为90%以上 加阻断剂的样本,胞内CD69表达为90%以上,则选择此时的刺激剂浓度作为最佳浓度。 5、Th1/Th2/Th17检测步骤,请参照胞内CD69的染色,即把CD69抗体换成同型对照或者相应的...
1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本;2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。1)PMA 25ng/mlIonomysin 1ug/ml2)PMA 125ng/m
10.用Cellometer Auto 2000计数细胞。 11.用P2F再次洗涤第6步中的细胞,室温下 400×g离心10分钟,去上清。 12.加入适量P2F,使细胞密度为5×10E6/ml。 三、用PMA/ionomycin/brefeldin A刺激细胞 13.将200μl细胞悬浮液(1×10E6个细胞)吸到96孔圆底板的每个孔中。
1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本;2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。1)PMA 25ng/mlIonomysin 1ug/ml2)PMA 125ng/m