来,从原理上理一下 无论是科研上验证T细胞和B细胞的功能,还是临床上诊断免疫缺陷,都需要检测T细胞和B细胞的功能。 我们大家都知道,PMA和离子霉素可以活化T细胞,CD3/CD28也可以活化,但他们之间究竟存在什么样原理上的差异,你们想过吗? 从下面这8张PPT截图,以及两幅动画(如网速慢请等待加载完成),我们从原理层面进行...
回答者:网友 Th细胞检测中的PMA和离子霉素的刺激浓度 1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本; 2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。 注:浓度梯度可自由调整,以获得最佳的刺激浓度 3、 将刺激...
分装为20ul一管,–20°C可保存6个月。 (4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomy...
(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA...
1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本;2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。1)PMA 25ng/m
三、用PMA/ionomycin/brefeldin A刺激细胞 13.将200μl细胞悬浮液(1×10E6个细胞)吸到96孔圆底板的每个孔中。 要使用的孔数取决于实验设计 14.将板在470×g、4℃下离心5分钟。 15.用连接在真空泵上的针头吸出上清液。(流式中文网注:这里也可以用枪头小心去上清)。
Phorbol 12-myristate 13-acetate(佛波肉豆蔻醋酸),简称为PMA,一种广泛用于体内外实验的佛波酯(phorbol ester )类PKC激活剂,PMA可抑制Fas诱导的细胞凋亡,同时又可诱导HL-60细胞的周亡发生。PMA是一种强效的肿瘤促进剂能够诱导小鼠皮肤瘤生成。常常与离子霉素Ionomycin联合刺激多种免疫细胞,以产生细胞因子。同时也与蛋白...
PMA/Ionomycin Mixture (250×)是佛波酯(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, PMA)和离子霉素(Ionomycin)的混合物。PMA和Ionomycin处理足以诱导很多类型的细胞活化,分泌细胞因子。该混合物可用于刺激体外培养细胞产生细胞因子,随后用免疫学方法进行检测。还可以与蛋白转运抑制剂(BFA/Monensin Mixture (250×) (目录号CS1002...
PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate,佛波酯)和Ionomycin(离子霉素)是激活T细胞,促进细胞因子分泌的常用多克隆刺激剂。离子霉素(ionomycin)是对钙离子有亲和力的离子载体,与佛波酯(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, PMA)联合使用可以诱导很多类型的细胞活化,分泌细胞因子。BFA(Brefeldin A,布雷非德菌素A)则具有破坏细胞...
eBioscience™ Cell Stimulation Cocktail (500X) 是佛波醇酯 12-十四酸酯 13-乙酸酯 (PMA) 和离子霉素的混合物。PMA激活Protein Kinase C, 离子霉素Ionomycin 促进Ca2+穿膜运动,使用 PMA 和离子霉素进行处理足以诱导大多数细胞类型激活,使得CD69, CD154表达升高,产生细胞因子:IL-2、IFN-γ和TNF-α。这种混合...