(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成...
Th细胞检测中的PMA和离子霉素的刺激浓度 1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本; 2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。 注:浓度梯度可自由调整,以获得最佳的刺激浓度 3、 将刺激后的血样分别做...
(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成...
Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X) 是佛波醇酯 12-十四酸酯 13-乙酸酯 (PMA)、离子霉素、Brefeldin A 和莫能菌素的混合物。使用 PMA 和离子霉素进行处理足以诱导大多数细胞类型激活,产生细胞因子。Brefeldin A 和莫能菌素可导致内质网和高尔基体中出现分泌性蛋白蓄积。因此,Cell ...
三、用PMA/ionomycin/brefeldin A刺激细胞 13.将200μl细胞悬浮液(1×10E6个细胞)吸到96孔圆底板的每个孔中。 要使用的孔数取决于实验设计 14.将板在470×g、4℃下离心5分钟。 15.用连接在真空泵上的针头吸出上清液。(流式中文...
三、用PMA/ionomycin/brefeldin A刺激细胞 13.将200μl细胞悬浮液(1×10E6个细胞)吸到96孔圆底板的每个孔中。 要使用的孔数取决于实验设计 14.将板在470×g、4℃下离心5分钟。 15.用连接在真空泵上的针头吸出上清液。(流式中...
用500ul PBS重悬细胞,上机检测。 4、结果处理: 不加阻断剂的样本,胞外CD69表达为90%以上 加阻断剂的样本,胞内CD69表达为90%以上,则选择此时的刺激剂浓度作为最佳浓度。 5、Th1/Th2/Th17检测步骤,请参照胞内CD69的染色,即把CD69抗体换成同型对照或者相应的细胞因子抗体即可。
用500ul PBS重悬细胞,上机检测。 4、结果处理: 不加阻断剂的样本,胞外CD69表达为90%以上 加阻断剂的样本,胞内CD69表达为90%以上,则选择此时的刺激剂浓度作为最佳浓度。 5、Th1/Th2/Th17检测步骤,请参照胞内CD69的染色,即把CD69抗体换成同型对照或者相应的细胞因子抗体即可。
Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X) 是佛波醇酯 12-十四酸酯 13-乙酸酯 (PMA)、离子霉素、Brefeldin A 和莫能菌素的混合物。使用 PMA 和离子霉素进行处理足以诱导大多数细胞类型激活,产生细胞因子。Brefeldin A 和莫能菌素可导致内质网和高尔基体中出现分泌性蛋白蓄积。因此,Cell ...
1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本;2、 准备6份样本,按以下浓度加入刺激剂和阻断剂,37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时(不要超过6小时),中间混匀几次。1)PMA 25ng/mlIonomysin 1ug/ml2)PMA 125ng/m