接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成的活化培养基各成份终浓度分别为PMA 10ng/ml、Ionomycin 1ug/ml、Brefeldin A 10ug/m...
(4)利用以上三样试剂配制活化淋巴细胞培养基:解冻PMA、Ionomycin、Brefeldin A各一管。向180ul X-VIVO 15培养基中加入20ul 0.1mg/ml PMA(即PMA:培养基=1:10)。接着向15ml锥形管中加入4ml X-VIVO 15培养基,再加入刚才稀释好的PMA 4ul,再加入8ul 0.5mg/ml Ionomycin、8ul 5mg/ml Brefeldin A。这样配成...
在流式胞内染色中常用的活化细胞方法就是用一定浓度的PMA和Ionomycin刺激细胞4-6小时,同时加入蛋白转运抑制剂(通常是monensin或brefeldin A)来阻止高尔基体将新分泌蛋白运输到细胞外,从而达到通过流式来检测胞内细胞因子的目的。经常会有老师有这样的疑问:加入PMA和Ionomycin,不会间接影响我的实验样本的胞内因子分泌情况...
PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate,佛波酯)和Ionomycin(离子霉素)是激活T细胞,促进细胞因子分泌的常用多克隆刺激剂。离子霉素(ionomycin)是对钙离子有亲和力的离子载体,与佛波酯(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, PMA)联合使用可以诱导很多类型的细胞活化,分泌细胞因子。BFA(Brefeldin A,布雷非德菌素A)则具有破坏细胞...
Ionomycin：钙离子载体，使细胞内Ca 2+浓度增加，激活calcineurin。来自PKC和calcineurin的共同信号最终引起T细胞活化。PHA：植物血凝素类多克隆刺激剂，作用于TCR－CD3复合体引起T细胞活化。PMA+Ion由于直接作用于T细胞活化信号传导通路的中游，细胞活化快，2h大部分细胞已活化，4h基本全部活化，作用强劲。PHA作用6h的效果...
PMA:佛波醇酯类多克隆刺激剂,是DAG(二酯酰甘油)的analog,脂溶性,自由通过细胞膜,直接作用于细胞活化信息传导通路上的PKC。Ionomycin:钙离子载体,使细胞内Ca 2+浓度增加,激活calcineurin。来自PKC和calcineurin的共同信号最终引起T细胞活化。 PHA:类多克隆刺激剂,作用于TCR-CD3复合体引起T细胞活化。PMA+Ion由于直接作用...
离子霉素(Ionomycin)作为一种钙离子载体,可提高胞浆内游离Ca2+的水平,活化依赖Ca2+/钙调蛋白生物途径。所以,如前面所说PMA和Ionomycin的共同作用可以起到激活细胞的作用。 PMA&Ionomycin与流式检测 1.PKC属于下游的TCR信号,只会诱导T细胞活化和增殖,因此,PMA和Ionomycin的刺激后T细胞的活化和增殖能力改变,然而并不会...
Ionomycin则能使细胞膜外Ca2+进入膜内增加,导致细胞内游离钙浓度升高;即使细胞膜或内质网本身存在缺陷不能使细胞内的游离钙浓度升高,IONO也能模拟Ca2+依赖的生物学事件。但单用Ionomycin并不能激活T淋巴细胞,单用PMA刺激T细胞的强度也不够,只有PMA+Ionomycin联合应用才是使T细胞进入细胞周期的有效的方法之一...
PMA即 Phorbol 12-myristate 13-acetate,一种佛波酯,二酰基甘油(DG)的一种类似物,可通过与蛋白激酶C(PKC) 的C1区结合而使后者激活,产生类似于“双信使系统”的级联反应,信号通路研究中,可与PHA/Ionomycin联合使用刺激细胞产生细胞因子,以及与蛋白转运抑制剂如Monensin和Brefeldin A连用研究细胞因子在细胞内的滞留等...
PMA:佛波醇酯类多克隆刺激剂,是DAG(二酯酰甘油)的analog,脂溶性,自由通过细胞膜,直接作用于细胞活化信息传导通路上的PKC。 Ionomycin(离子霉素MB1379):钙离子载体,使细胞内Ca 2+浓度增加,激活calcineurin。来自PKC和calcineurin的共同信号最终引起T细胞活化。