综上所述,我们构建了S1蛋白纳米颗粒,并将其作为抗原进行了表达和纯化,利用细胞融合技术制备了5种单克隆抗体。重要的是,mAb 12G可以中和PEDV的G1和G2基因型。两个新的b细胞表位507FNDHSF512和553LFYNVTNSYG562被mAb 4C和mAb 12G识别,...
结果证实了 DNAJA3 和 PEDV S1 在体外以及在表达这两种蛋白或感染 PEDV 的细胞中的相互作用。 为了确定与 DNAJA3 特定相互作用的 S1 区域,作者构建了一系列 S1 截短体。Co-IP 测定显示 S1 片段 1–479 (T3) 和 1–649 (T4) ...
1. 采集病料:从出现腹泻症状的猪只采集粪便或肠道组织等样品。 2. 提取病毒RNA:使用适当的试剂和方法从病料中提取PEDV的RNA。 3. 反转录PCR扩增:以提取的RNA为模板,利用反转录酶和特异性引物进行反转录PCR扩增,得到S1基因的DNA...
利用SpyTag/SpyCatcher系统组装纳米颗粒和截断的S1蛋白,获得的5个单抗可结合多种PEDV基因型,其中1个单抗(12G)在体外可中和PEDV G1和G2基因型并,首次鉴定507FNDHSF512和553LFYNVTNSYG562为B细胞线性表位,其中553LFYNVTNSYG562为中和性表位。这些发现可以作为进一步研究PEDV的基础,并为创建后期检测和诊断技术提供潜在资...
8.步骤一、重组质粒pnz8149-pedv s1-jl的制备; 9.步骤二、乳酸菌nz3900感受态的制备; 10.步骤三、电转化制备pedv流行毒株s1基因重组乳酸乳球菌; 11.步骤四、利用特异性鉴定引物对pedv流行毒株s1基因重组乳酸乳球菌进 行pcr鉴定;所述特异性鉴定引物序列如seq id no.2和seq id no.3所示。
PEDV变异株的分离鉴定和S1基因序列分析
主要针对PEDV S1蛋白选择九条不同 的多肽片段,并利用BALB/C小鼠单克隆抗体制备技术得到识别相 应多肽片段的单克隆抗体,针对九条不同多肽表位获得的单克隆抗 体与重组原核表达的PEDV S1蛋白识别效果进行对比,最后证实在 所选的九条多肽表位片段中,以序列90至102、 621至637、718至 731这三条多肽的抗原性最好。
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重组干酪乳杆菌荧光定量PCR质粒拷贝数S1蛋白的表达量探究质粒拷贝数以及目标蛋白S1表达量与发酵时间的关系,从而确定放大生产pLA-PEDV-S1/ Lactobacillus casei 的最佳发酵时间.通过发酵重组干酪乳杆菌,绘制重组干酪乳杆菌的生长曲线,确定其生长的最佳时期.将pLA-PEDV-S1/ L.casei 分别接种至添加抗生素和不添加抗生素的MRS...
进一步地,所述人工合成为以pedv-s1-f1和pedv-s1-r1为引物组合对pedv-s1基因进行pcr扩增;其中,所述pedv-s1-f1具有如seqidno.2所示序列,pedv-s1-r1具有如seqidno.3所示序列。本发明还提供了一种猪流行性腹泻病毒s1蛋白,应用上述的表达载体制备得到。本发明还提供了一种表达猪流行性腹泻病毒s1蛋白的表达载体,以...