2. 提取病毒RNA:使用适当的试剂和方法从病料中提取PEDV的RNA。 3. 反转录PCR扩增:以提取的RNA为模板,利用反转录酶和特异性引物进行反转录PCR扩增,得到S1基因的DNA片段。 4. 测序分析:将扩增得到的DNA片段进行测序,得到S1基因的...
2017—2018年,在湖南、湖北、广西等8个省份39个猪场采集的184份腹泻样品中,扩增出有代表性的14株PEDV毒株S1基因,经基因遗传演化分析发现,11株属于G2a亚型,并且与2011年在湖北省分离的高致病强毒株AJ1102(JX188454.1)亲缘关系近,3株属于G2b,...
S基因的变异通常和毒力的显着变化有关,并且是病毒跨物种传播的潜在危险因素。S蛋白的胞外域包括 S1 和 S2 亚基,它们分别负责特异性受体结合和细胞膜融合。已经证明PEDV S1与假定的多肽受体相互作用,并且还在诱导细胞凋亡中发挥作用。 作为热...
S蛋白的S1亚基对于触发与受体结合的中和抗体至关重要。利用SpyTag/SpyCatcher系统组装纳米颗粒和截断的S1蛋白,获得的5个单抗可结合多种PEDV基因型,其中1个单抗(12G)在体外可中和PEDV G1和G2基因型并,首次鉴定507FNDHSF512和553LFYNVTNSYG562为B细胞线性表位,其中553LFYNVTNSYG562为中和性表位。这些发现可以作为进一...
2022 年,华中农大诊断中心对来自全国25 个省、市、自治区共434份PEDV阳性样品进行S1 基因测序,对测序结果进行分析,G2a 毒株为目前最主要的流行毒株,占比高达75%(325 份);其次是G2b 毒株,占比16% (68 份)、S-INDEL毒株占比9%(39 份);而经典毒株只占比0.46%(2份)。值得关注的是,S-INDEL 毒株的检出率明...
PEDV变异株的分离鉴定和S1基因序列分析
在2013-2014年美国猪腹泻病爆发期间,检测到两个不同的PEDV基因群组,即S INDEL(PEDV变异株,包含刺突蛋白(S)的S1亚单位的多处缺失和插入,G1b)和non-S INDEL(G2b)毒株。类似的病毒也正在全球范围内传播。要控制和预防全球的PEDV感染,仍然需要不断改进和更新生物安全、疫苗毒株和规程。尽管non-S INDEL PEDV的毒力...
PEDV-RBD基因结构示意图 左:重组质粒鉴定 右:PCR鉴定 最后利用Anti-strep tag抗体和抗PEDV S蛋白抗体对重组杆状病毒进行IFA鉴定,表明外源PEDV-RBD基因在杆状病毒中成功表达。 IFA鉴定PEDV-RBD蛋白的表达 重组蛋白pFBD-PER的Western blot鉴定 普健生物昆虫杆状病毒表达系统物利用经典Bac-to-Bac 技术,打造了一个快速简...
这些特质归功于Nsp14基因表达的外核糖核酸酶的校对活性。鉴于冠状病毒的高保真性,PEDv积累了病毒适应性所需的突变或重组事件后实现了缓慢的进化。基于单个基因或者全基因组的进化树分析是解密不同毒株之间的亲缘关系的重要武器。在PEDv的遗传进化研究中,全长S基因及其S1部分 (aa 1-735) 被认为是用于研究PEDV的遗传...
S1-R:5 ́-ATGCGGCCGCAACACCTGCCAAAAAGC-3 ́; 该引物扩增片段大小为639bp。 2.PEDV M基因和S1基因串联重组质粒的构建方法,其特征在于:选择PEDV流行毒株的基因组为模版,分别针对S1基因和M基因的主要抗原位点,设计特异性引物,以PET32a为表达载体,设计特异的酶切位点,构建S1基因和M基因的串联重组质粒。 3....