本研究通过体内全基因组CRISPR失活筛选,在小鼠三阴性乳腺癌(TNBC)模型中,揭示了CD28在癌细胞中的非经典功能(促进肿瘤免疫逃逸)。具体来说,研究人员使用了123,666个探针对20,611个基因和1,000个非靶向控制sgRNA的小鼠慢病毒敲除文库(mGeCKOv2)。在经过14天的普鲁霉素筛选后,携带mGeCKOv2的小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞...
· 结果分析:在众多靶向候选基因中,靶向 VPS18 和 VPS11 的 sgRNA 在 CD8⁺细胞毒性 T 细胞(CTL)选择中呈负富集,表明靶向 VPS11/18 可能增强 CTL 对癌细胞的清除。如代表整体生物发光图像(图 1B)显示不同处理下小鼠肿瘤生长情况,量化的 Kaplan - Meier 生存曲线(图 1C)和肿瘤体积变化(图 1D)表明抗 ...
鉴于KAT8是哺乳动物细胞中H4K16ac的主要乙酰转移酶,作者调查了KAT8是否调控PD-L1启动子中的H4K16ac。表达针对KAT8的sgRNA的细胞显示H4K16ac总体减少,而其他H4乙酰化位点(H4K5ac、H4K8ac和H4K12ac)保持不变(图6a)。来自ENCODE数据库的染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)数据显示KAT8和IRF1富集在PD-L1的启动子区域...
鉴于KAT8是哺乳动物细胞中H4K16ac的主要乙酰转移酶,作者调查了KAT8是否调控PD-L1启动子中的H4K16ac。表达针对KAT8的sgRNA的细胞显示H4K16ac总体减少,而其他H4乙酰化位点(H4K5ac、H4K8ac和H4K12ac)保持不变(图6a)。来自ENCODE数据库的染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)数据显示KAT8和IRF1富集在PD-L1的启动子区域...
在接种后的6、8和10天收集肿瘤细胞进行sgRNA测序,以体外经过14天普鲁霉素筛选的4T1细胞(P14)作为对照(图1A)。研究人员还采用了药物诱导的CD28敲低、流式细胞术、单细胞RNA测序(scRNA-seq)、免疫荧光、多重免疫荧光(mIF)和免疫组化等技术,以深入研究CD28在肿瘤免疫逃逸中的作用。
一致地，CDK5与sgRNA的遗传耗竭或CDK5与PNU112455A（PNU）的药理学抑制也上调了PD-L1的蛋白水平（图1E，F）。此外，通过处理 293 个 T 细胞中的 PNU 观察到 Flag-PD-L1 水平升高，具有时间依赖性和剂量依赖性（图 1G，H）。此外，发现BEL-7402和SMMC-7721细胞表面PD-L1的上调呈剂量依赖性（图 1I）。此外...
使用MAGeCK分析并比较了PD-L1低亚群和高PD-L1亚群之间的sgRNA丰度。我们的筛选确定TRIM28，也称为TIF1β和KAP1，是PD-L1的顶级假定调节因子之一。我们进行了几项生化分析，以阐明TRIM28对G.C.细胞中PD-L1稳定性和表达的影响。为了研究TRIM28耗竭或过表达对G.C.细胞中全局基因表达的影响，进行了RNA-seq。利用...
为此,他们使用共表达Gfap驱动的CRISPR-Cas9和一个靶向sgRNA的慢病毒载体,在星形胶质细胞中消除了Cd274基因的表达(Gfap-Cd274)(图3d)。此外,高维度流式细胞仪分析,随后进行降维和聚类,进一步揭示了在Gfap-Cd274小鼠中炎症细胞簇的扩展(图...
(2012).12. Shao, S. et al. Multiplexed sgRNA Expression Allows Versatile Single Nonrepetitive DNA Labeling and Endogenous Gene Regulation. ACS Synth Biol 7, 176-186 (2018).（可上下滑动阅览）原标题：《【学术前沿】康铁邦/武远众团队揭示阻断KAT8-IRF1凝聚体形成可抑制PD-L1表达并增强抗肿瘤免疫》
12. Shao, S.et al.Multiplexed sgRNA Expression Allows Versatile Single Nonrepetitive DNA Labeling and Endogenous Gene Regulation.ACS Synth Biol7, 176-186 (2018). (可上下滑动阅览)