基因敲除目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一.利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型.方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F_0代阳性小鼠.F_0代小鼠与野生型C5...
进一步优选的,所述啮齿类动物为小鼠。优选的,本发明还获得了一种pd-1基因敲除细胞株,使用靶向pd-1基因的载体将细胞株中pd-1基因部分或全部敲除。进一步优选的,使用靶向pd-1基因的sgrna或编码sgrna的dna分子或包含sgrna的载体敲除细胞株pd-1基因的第2号外显子的全部或部分制备获得。本发明的第三方面,涉及一种构建...
相似的结论在另一项研究中也得到了验证,并且在随后建立的荷瘤小鼠模型中,研究小组发现,相较对照组和空白组,注射PD-1敲除的LMP2A-CTL(由LMP2A蛋白诱导产生的特异性CTL)的小鼠生存率明显提高、肿瘤实质 CD3+T细胞浸润增加并伴随IL-2、IFN-γ等抗肿瘤细胞因子水平的升高[10]。CRISPR-Cas9技术介导T细胞PD-1基因敲除...
利用腺相关病毒(AAV)载体表达人SLC6A3基因,并在新生DTDS模型小鼠侧脑室注射可提供人类DAT的神经元表达,从而改善了小鼠的运动表型、生存期及黑质和纹状体内神经元的存活,尽管在高剂量时出现了非靶向神经毒性作用。成年敲除小鼠中脑立体定位注射AAV2.SLC6A3的基因治疗可避免上述问题,挽救了运动表型和神经退行性病变,...
之后通过构建基因敲除细胞系,q RT-PCR,Western Blot,si RNA文库等技术分别在转录和转录后水平继续探索所选药物上调PD-L1表达的分子机制.同时,构建PD-L1 KO细胞系,在免疫功能健全的小鼠LLC或LLC~(PD-L1-)荷瘤模型上验证经筛选的抗肿瘤药物可通过上调PD-L1表达增强PD-1/PD-L1抑制剂对NSCLC的治疗效果.结果:细胞...
利用免疫正常小鼠和T细胞缺陷小鼠的胃癌细胞移植瘤模型进一步确认LSD1缺失可以通过T细胞抑制胃癌的发展。同时在体外构建的胃癌细胞与T细胞共培养模型中验证了LSD1缺失可以增强T细胞对胃癌细胞的杀伤功能,初步确定了LSD1在胃癌免疫微环境中能够通过T细胞促进胃癌发展。
利用免疫正常小鼠和T细胞缺陷小鼠的胃癌细胞移植瘤模型进一步确认LSD1缺失可以通过T细胞抑制胃癌的发展。同时在体外构建的胃癌细胞与T细胞共培养模型中验证了LSD1缺失可以增强T细胞对胃癌细胞的杀伤功能,初步确定了LSD1在胃癌免疫微环境中能...
为了 探讨 PDCD2 在 HIV-1 潜伏感染 T 细胞中的作用,我 们利用 ACH2 细胞株,构建了稳定转染 PDCD2 的 HIV-1 潜伏感染 T 细胞株,证实了 PDCD2 可以促进 TRAIL 刺激下 HIV-1 潜伏感染细胞的凋亡以及 HIV 病毒的释放,提示 PDCD2 在诱导 HIV-1 潜伏感染细 胞的凋亡及 HIV 病毒活化的过程中扮演重要角色...
曹永清 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 284 利用 CRISPR/Cas9 技术构建脂多糖结合蛋白基因敲除小鼠 李思迪,付彬,郭中坤,林颖杰,张振宇,米传靓,王可洲 ⋅⋅⋅⋅⋅ 294 放置时间对大鼠血清样本中电解质含量及 pH 值的影响 冯丁山,黄业宇,张晓昕,吴爱琴,王湛,苏林梁...
药物筛选初期,在人源化的体外模型的基础上进 行高通量药物筛选和初步评估,选出的药物再通过动 物模型进行验证,从而提高药物研发的效率和准确度, 减少动物用量.在药物验证阶段,动物模型也可以和 人源化的体外模型相结合,提高药物筛选的效率.如, 目前已有研究建立了类器官移植瘤小鼠模型 (patient- derived organoids...