首先，研究人员构建了一种慢病毒，携带改良的脱氧胞苷激酶（DCK*）和GFP，其基因表达由人工NF-κB响应性启动子调控。通过这种方法，他们能够调控NF-κB信号通路的活性，影响细胞对毒素溴乙烯脱氧尿苷（BVdU）的敏感性。荧光激活细胞分选技术证实了NF-κB活性对DCK*和GFP表达的影响。通过CRISPR-Cas9技术失活内源性NF-...
首先,研究人员构建了一种慢病毒,携带改良的脱氧胞苷激酶(DCK*)和GFP,其基因表达由人工NF-κB响应性启动子调控。通过这种方法,他们能够调控NF-κB信号通路的活性,影响细胞对毒素溴乙烯脱氧尿苷(BVdU)的敏感性。荧光激活细胞分选技术证实了NF-κB活性对DCK*...
NF-κB-GFP报告基因是翊圣生物自主研发的用于检测NFκB转录活性水平为目的的报告基因。 NF-κB基因在炎症反应、免疫应答和抑制细胞凋亡等方面有着重要的作用。 NF-κB-GFP报告基因主要应用于NF-κB信号通路的研究和基于NF-κB信号通路的药物研究以及癌细胞中NF-KB的调控机制的研究。 pGMNF-ΚB-GFP是翊圣生物改造后...
因此,作者将Flag-p65和HA-MG53共转染到HEK293细胞中,通过免疫共沉淀实验发现p65和MG53之间的确实存在较弱的直接相互作用(图4c)。GFP-p65和RFP-MG53质粒的共转染和共聚焦分析也证实了p65和MG53的共定位(图4d)。接下来,作者通过测量瞬时转染HA-M...
为了高效地筛选出以NF-kB为靶点的抗肿瘤药物,利用基因工程构建NF-kB的报告基因载体。具体原理为把已确定的NF-kB基因的调控序列(响应元件)和报告基因GFP(其表达产物荧光蛋白可被实时检测)正确地剪接在一起,使报告基因能与NF-kB基因同步表达,其工作模式见下图。 回答下列问题:NF-kB响应元件报告基因GFP报告基因载体...
然而, NFκB信号可能被其他机制激活。研究者使用已建立的荧光素酶报告基因测定法测试了Yap1在体外控制NFκB活性的能力。源自KP肿瘤的肉瘤细胞被GFP标记的NFκB报告基因结构感染,然后用表达对照或Yap1sh RNA的慢病毒感染。与处理后的对照shRNA表达细胞相比,用Tnfa处理的Yap1shRNA表达细胞中NFκB活性降低了约50%。
以d2EGFP作为报告分子来反映,监测NF-κB活性的研究尚处于起始阶段,构建带有d2EGFP,哺乳动物细胞筛选标记新霉素抗性基因和SV40基本启动子的载体,进而建立可诱导表达d2EGFP报告细胞株的研究尚未 见文献报道.因此本研究拟在含新霉素抗性基因的载体上,以dZEGFP为 报告基因建立较理想的NF-KB反应性报告系统,进行特异,灵敏,...
(4)绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因:GFP在紫外光下发射荧光,其荧光强度和蛋白表达量呈正相关,能够被多种方法检测。该报告基因检测不需要底物,GFP表达稳定,加热、变性剂、去垢剂及一般的蛋白酶均不能使它灭活【22】。结合全自动定量绘图酶标仪或聚焦显微镜,还可对转录 19、调节因子进行高通量...
一类为P50( NF- KB1)和P52( NF- KB2),分别由含有C-末端锚蛋白重复序列(ahkrin repeat motif)的前体蛋白p105和p100通过ATP依赖蛋白水解过程裂解而形成。该类蛋白含有RHD,但缺乏转录活性区,无独立激活基因转录的功能。另一类为p65(RelA),Rel(c-Rel),Rel B和果蝇的dorsal、Dif和Relish,它们没有前体,除N端的...
TNF-α在WT VSMC中诱导IκBα和p65磷酸化,而IKK2敲除阻断TNF-α诱导的IκBα和p65磷酸化(图2A),且阻断了TNF-α诱导的GFP-p65向细胞核的易位(图2B)。在高磷酸盐刺激下, IKK2敲除可以抵消TNF-α诱导的炎症标志物的增加 (图2C)。作者用单独的高磷酸盐或TNF-α加高磷酸盐处理VSMC。出乎意料的是,IKK2...