传递进入细胞：为了确保mRNA药物有效进入患者细胞内，需要一种有效的传递系统如脂质纳米颗粒（LNP），对其进行包裹保护，防止mRNA在到达作用部位前被酶解或无法穿透细胞膜。蛋白质合成：一旦mRNA进入细胞，它就会被细胞的蛋白质合成机制识别，并指导细胞合成所需的治疗性蛋白质。TFF技术在mRNA药物制备中的应用 1、mRNA生产...
第三步:递送系统装载 目的是将mRNA包裹进脂质载体(LNP)中。脂质悬浮于酒精溶液中,与mRNA接触并将其包裹,两种物质通过相反电荷相吸引。之后,原液经过切向流过滤(TFF)滤除溶液中多余的脂质、酒精等杂质,并制成最终的mRNA疫苗溶液。此生产过程耗时约12天。 【备注...
它在降低从层状相转变为六角相所需的温度中发挥着至关重要的作用;因此,来自LNP的mRNA货物将被递送到细胞质中。磷脂在LNP配方中的包含可以帮助提高封装效率(与胆固醇一起)并增加细胞递送。通常,LNP中的磷脂数量大大减少,同时增加胆固醇含量以延长循环时间。此外,磷脂的包含促进了LNP的包...
TFF工艺参数包括切向流速、跨膜压(TMP)、滤液通量、剪切力等。 2.4 除菌过滤与无菌灌装 除菌过滤与无菌灌装是LNP-mRNA成品生产的最后一步,涵盖LNP-mRNA、及包材/工器具、注射用水与压缩空气的无菌处理。 溶解在目标处方中的LNP-mRNA经0.22μm滤膜过滤除菌,保持mRNA的生物活性。LNP-mRNA除菌过滤工序在符合GMP规范的C...
图5: TFF(切向流过滤)系统 1.3 除菌过滤 除菌过滤是mRNA原液生产的最后一步。mRNA是一种生物活性物质,首选除菌方案是0.22μm滤膜过滤,去除细菌等微生物的同时保持mRNA的生物活性。除菌过滤后的mRNA原液处于无菌状态,利于mRNA原液稳定储存,用于随后的LNP包封工艺。
mRNA-LNP包封制备是mRNA制剂制备的关键工艺,除了脂质成分配方外,就是工艺过程的控制了,即如何控制mRNA与脂质成分的接触和相互作用过程,通过微流控技术以形成稳定、均一、收率高的mRNA-LNP复合物。mRNA-LNP溶液通过100kD/300kD TFF技术进行浓缩换液,mRNA-LNP复合物被截留,乙醇、制剂被洗滤。最后除菌过滤采用0.22μm...
随后,TFF逐渐增加整体pH到中性,其中阳离子可电离脂质逐渐变得不带电且疏水性更强。从而促使小泡融合,并导致可电离的脂质与mRNA进一步隔离到固体脂质纳米颗粒内部。PEG -脂质含量通过为LNP提供亲水性外表面来阻止融合过程,而形成中性磷脂(如DSPC)的双分子层就存在于PEG -脂质层的下方。需要优化的各种配方参数是脂质...
图5: TFF(切向流过滤)系统 1.3 除菌过滤 除菌过滤是mRNA原液生产的最后一步。mRNA是一种生物活性物质,首选除菌方案是0.22μm滤膜过滤,去除细菌等微生物的同时保持mRNA的生物活性。除菌过滤后的mRNA原液处于无菌状态,利于mRNA原液稳定储存,用于随后的LNP包封工艺。
目的是将mRNA包裹进脂质载体(LNP)中。脂质悬浮于酒精溶液中,与mRNA接触并将其包裹,两种物质通过相反电荷相吸引。之后,原液经过切向流过滤(TFF)滤除溶液中多余的脂质、酒精等杂质,并制成最终的mRNA疫苗溶液。此生产过程耗时约12天。 第四步:灌装检验 在上述三个生产阶段都完成后,mRNA疫苗原液已完成,只待灌装分发。
随后,TFF逐渐增加整体pH到中性,其中阳离子可电离脂质逐渐变得不带电且疏水性更强。从而促使小泡融合,并导致可电离的脂质与mRNA进一步隔离到固体脂质纳米颗粒内部。PEG -脂质含量通过为LNP提供亲水性外表面来阻止融合过程,而形成中性磷脂(如DSPC)的双分子层就存在于PEG -脂质层的下方。需要优化的各种配方参数是脂质...