三种方法同样适用于常规LNP的包封,仅需微调LNP配方。 01 选择性器官靶向LNP(SORT LNP)组成 尽管传统LNP是安全有效的,但它们仅限于肌肉注射(如COVID-19 mRNA-LNP疫苗)和针对肝细胞的静脉内给药,传统LNP的局限性很大程度上源于与极低密度脂蛋白...
高稳定性、高质量的微流控技术进行mRNA-LNP 的制备,可提供不同规格的高产量、高纯度、高性价比的 mRNA 和 mRNA-LNP 的定制化服务,可根据客户需求定制不同粒径大小的 LNP,同时提供 mRNA-LNP 的包封率、粒径、PDI、Zeta 电位等相关质量控制检测服务。
分别使用微流控制备的 LNP 和瀚海新酶的 Fast LNP（in vivo）进行肌肉给药，单次给药剂量 7.5 μg /只，于 6h 后腹腔注射 D-荧光素钾盐，进行 IVIS 活体成像。结果显示，瀚海新酶 Fast LNP（in vivo）与微流控包封的 LNP 在肝脾和肌肉的靶向效果相当。●腹腔注射 分别使用微流控制备的 LNP 和瀚海新酶...
本期文章菌菌将继续分享mRNA-LNP的制备流程，包括含mRNA的水相样品准备、LNP脂质混合物准备和微流控法包封LNP-mRNA。01 LNP脂质配制 该文章使用了一种商业化的四组分LNP试剂配方，这是一种针对T细胞递送优化的mRNA递送系统，其脂质组分及各脂质摩尔比为：可电离脂质:磷脂DSPC:胆固醇:稳定剂=50: 10:37.5: 2.5...
微流控包封LNP-mRNA的流程为:① 制备含脂质组分的乙醇,和含mRNA的水相,将两相溶液分别转移至注射器中,去除气泡;② 将两个注射器接通至微流控设备;③ 设置微流控参数:总进样量、乙醇相和水相的流速、排废体积;④ 收集的样品经透析去除乙醇,最终保存在PBS缓冲液中。
mRNA-LNP制剂生产工艺大致可分为4个单元:mRNA与脂质配液、LNP包封、超滤换液、除菌过滤与无菌灌装。 图1:mRNA生产路线图 mRNA原液生产 1.1体外转录(IVT) 以线性化质粒为模板,通过体外转录(IVT)能够高效合成1~10 kb长度的mRNA。出于高特异性和转录活性的考虑,mRNA工艺生产中最常用的RNA聚合酶是源自T7噬菌体的RNA...
文章详细描述了mRNA疫苗的制备和体内外活性评估实验步骤,包含:mRNA序列设计、体外转录(IVT)模板DNA制备、IVT mRNA制备、mRNA-LNP包封、RNA质量检测和mRNA疫苗的免疫原性评估(体外细胞和体内小鼠试验)。 前期文章中,菌菌介绍了mRNA疫苗的序列设计、mRNA转录模板、体外转录(IVT)和mRNA纯化的实验流程。
文章详细描述了mRNA疫苗的制备和体内外活性评估实验步骤,包含:mRNA序列设计、体外转录(IVT)模板DNA制备、IVT mRNA制备、mRNA-LNP包封、RNA质量检测和mRNA疫苗的免疫原性评估(体外细胞和体内小鼠试验)。 01 Ribogreen荧光法检测原理 测定260 nm吸光值(A260)是核酸定量最常用的分析技术。吸光度法操作简单,但由于蛋白质...
二、不同LNP组分或RNA长度的包封效果 2.1 包封率检测结果 如图1所示,文章按照可电离阳离子脂质(MC3或 ALC-0315)、磷脂(DSPC 或DOPE)、胆固醇和辅助脂质(DMG-PEG2000)配制脂质处方,摩尔比为50:10:38.5:1.5,可电离阳离子脂质与RNA 的比率保持在60:1(w/w),每种配方都对5 种不同长度的RNA进行了测试。结果发...
平台性的mRNA原液和LNP-mRNA成品生产工艺包括mRNA 原液单元:体外转录(IVT)、mRNA 纯化、除菌过滤,和mRNA-LNP制剂生产工艺:mRNA与脂质配液、微流控包封、超滤换液、除菌过滤与无菌灌装。 基于在mRNA制备方面的开创技术和丰富经验,耀海生物可为全球客户提供mRNA一站式制备服务,涵盖mRNA小样制备、工艺开发、分析方法开发...