LNP的包封率 包封率是 mRNA-LNP 的一个非常关键的指标,表示包封在脂质纳米颗粒内的 RNA 占总 RNA 的比例,通常通过荧光染料法进行表征,主要影响药物的递送效率、稳定性、安全性。高包封率 LNP 可以确保更多的药物分子被有效递送至目标细胞,提高治疗效果;在体内外...
用动态光散射 (DLS) 原理检测分析包封后mRNA粒度大小和分布,SM102包封Fluc-eGFP mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP)后粒径为115.7nm,PDI为0.09。 图7 mRNA-LNP粒径和PDI检测 2、mRNA-LNP包封率检测 包封率是指包裹在脂质纳米颗粒内部的mRNA占全部mRNA的比例,它可以评估LNP有效成分的装载...
包封率检测结果显示,mRNA-LNP的包封率在,且同一LNP配方的不同批次间结果具有一致性。 基于荧光结合原理,耀海团队开发了稳定的LNP包封率检测方法。我们对一种报告荧光素酶mRNA:Luciferase mRNA-LNP进行了多次检测,耀海平台工艺下LNP包封率达到90%以上。 耀海RNASci平台交付的多个mRNA-LNP样品检测结果显示,我们的微...
1. 空气-液界面力:震荡过程中,空气泡与LNP接触,导致LNP表面PEG化脂质的脱落,减少了LNP之间的空间位阻。 2. LNP合并:空间位阻减少后,相邻的LNP容易发生合并,形成更大的LNP。 3. mRNA释放:在LNP合并过程中,部分mRNA可能从LNP中释放,导致mRNA封装效率下降。 图11:LNP粒径增大,包封率下降的机制示意图 震荡对mRNA...
实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...
图2 mRNA纳米颗粒的包封率情况 作者通过了肝素置换实验,对纳米颗粒的稳定性进行了进一步的研究(图3)。肝素是一种大的阴离子多糖,具有与核酸结合竞争并破坏复合物稳定性的能力。在这项研究中,制备的mRNA纳米颗粒,在37°C浓度递增的肝素钠孵育1小时。结果,即使在高浓度的肝素钠下,mRNA 也未从分支化的 PEI 或 Su...
✦ mRNA制剂分析-包封率检测 包封率是mRNA-LNP非常关键的指标,表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例,是确定LNP药物制剂精确给药剂量的基础!通过对其包封率的检测,不仅可以优化LNP相关的配方和包封参数,同时也可以监测mRNA-LNP稳定性随时间发生的改变。
肽偶联后，所有配体含量下的LNP对mRNA的包封率在95%以上。冷冻电子显微镜分析显示，含肽和不含肽的LNP-mRNA颗粒形态一致。这种方法获得的纳米颗粒用于后续的小鼠试验。第二种方法使用DMG-PEG-COOH-NHS作为功能化PEG脂质，替换 LNP中一定摩尔量的聚乙二醇脂质，通过在C端添加赖氨酸修饰MH42，并通过其侧链的伯胺偶联。
文中通过比较不同大小RNA分子的包封情况,发现所有测试的LNP中都存在一个趋势:较大的RNA分子,具有较大的净电荷,可以更有效地与可电离脂质复合,从而产生更高的封装率。具体的包封率结果为ASO 16~23%,siRNA 25~33%,适配体8~31%,996碱基mRNA35~ 49%,1929 碱基mRNA为35~45%。用ALC和DSPC配制的LNP显示出最高...
将纯化后的m1Ψ修饰VEGFA mRNA与对照品Poly(C) RNA和Luc mRNAs包封在LNP中，其中mRNA水溶液在pH=4.0时与可电离的阳离子脂质(pKa=6.0-6.5)、磷脂酰胆碱、胆固醇和溶解在乙醇中的聚乙二醇脂质溶液快速混合，基于电离阳离子脂质的LNP组合物的直径为80 nm，多分散指数（PDI）<0.1，包封率为95%，mRNA浓度为1...