实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...
包封率是mRNA-LNP非常关键的指标,表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例,是确定LNP药物制剂精确给药剂量的基础!通过对其包封率的检测,不仅可以优化LNP相关的配方和包封参数,同时也可以监测mRNA-LNP稳定性随时间发生的改变。 对于包封率的检测,申基生物使用RiboGreen荧光染料可以检测到低至1ng/ml浓度的RNA,...
首先检测LNP-RNA溶液中游离在LNP颗粒外的RNA数量，接着用Triton-100破坏LNP结构，使得RNA释放到外部溶液中，检测出溶液中全部的RNA数量。两者的差值就是被包封在LNP颗粒内部的RNA数量，从而获得包封率。图2 Riogreen检测LNP包封率流程 不同片段的RNA对RiboGreen检测荧光信号的影响 1998年，Victoria L. Singer发表的文...
包封率是LNP-RNA非常关键的指标,表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例。如果LNP-RNA生物学活性很低,那原因可能是多方面的,但是如果可以知道纳米脂质颗粒内部包封的RNA含量是正常的,就可以排除制剂包封过程出现问题。通过包封率的检测,不仅可以摸索LNP配方和包封参数,...
二、不同LNP组分或RNA长度的包封效果 2.1 包封率检测结果 如图1所示,文章按照可电离阳离子脂质(MC3或 ALC-0315)、磷脂(DSPC 或DOPE)、胆固醇和辅助脂质(DMG-PEG2000)配制脂质处方,摩尔比为50:10:38.5:1.5,可电离阳离子脂质与RNA 的比率保持在60:1(w/w),每种配方都对5 种不同长度的RNA进行了测试。结果发...
包封率是指包裹在脂质纳米颗粒内部的mRNA占全部mRNA的比例,它可以评估LNP有效成分的装载效率。 用RiboGreen荧光染料检测Fluc-eGFP mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP)包封率,包封率大于95%。 图8 mRNA-LNP包封率检测 mRNA系列解决方案 心动服务1 *mRNA序列设计与优化 ...
1.1RNA-LNP包封率(Encapsulationefficiency,EE):包裹在脂质纳米粒内部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。 1.2 RiboGreen检测RNA原理:RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料,当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时,几乎没有荧光活性,与RNA结合时,其荧光活性将增加1000倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激...
实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...
如果LNP-RNA生物学活性很低,那原因可能是多方面的,但是如果可以知道纳米脂质颗粒内部包封的RNA含量是正常的,就可以排除制剂包封过程出现问题。通过包封率的检测,不仅可以摸索LNP配方和包封参数,也能够监测LNP-RNA稳定性随时间发生的改变。 为什么选择RIbogreen作为RNA浓度检测试剂?
实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...