实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...
首先检测LNP-RNA溶液中游离在LNP颗粒外的RNA数量，接着用Triton-100破坏LNP结构，使得RNA释放到外部溶液中，检测出溶液中全部的RNA数量。两者的差值就是被包封在LNP颗粒内部的RNA数量，从而获得包封率。图2 Riogreen检测LNP包封率流程 不同片段的RNA对RiboGreen检测荧光信号的影响 1998年，Victoria L. Singer发表的文...
包封率是mRNA-LNP非常关键的指标,表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例,是确定LNP药物制剂精确给药剂量的基础!通过对其包封率的检测,不仅可以优化LNP相关的配方和包封参数,同时也可以监测mRNA-LNP稳定性随时间发生的改变。 对于包封率的检测,申基生物使用RiboGreen荧光染料可以检测到低至1ng/ml浓度的RNA,...
多分散性指数(PDI)是衡量LNP样品粒径均一性的指标,颗粒大小均匀的样本具有较小的PDI,反之PDI更高。 用动态光散射 (DLS) 原理检测分析包封后mRNA粒度大小和分布,SM102包封Fluc-eGFP mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP)后粒径为115.7nm,PDI为0.09。 图7 mRNA-LNP粒径和PDI检测 2、mRNA-...
二、不同LNP组分或RNA长度的包封效果 2.1 包封率检测结果 如图1所示,文章按照可电离阳离子脂质(MC3或 ALC-0315)、磷脂(DSPC 或DOPE)、胆固醇和辅助脂质(DMG-PEG2000)配制脂质处方,摩尔比为50:10:38.5:1.5,可电离阳离子脂质与RNA 的比率保持在60:1(w/w),每种配方都对5 种不同长度的RNA进行了测试。结果发...
正是基于此,选择RiboGreen作为核酸染料来检测RNA浓度。首先检测LNP-RNA溶液中游离在LNP颗粒外的RNA数量,接着用Triton-100破坏LNP结构,使得RNA释放到外部溶液中,检测出溶液中全部的RNA数量。两者的差值就是被包封在LNP颗粒内部的RNA数量,从而获得包封率。 Riogreen检测LNP包封率流程...
Moderna公司利用RiboGreen检测LNP包封率 RiboGreen检测RNA原理 要检测LNP内部包封RNA的含量,没有直接测量的方法,需要把LNP裂解掉,释放内部的RNA,因此检测与RNA结合的染料产生的信号时,要不会受到溶液中存在的LNP组分干扰。正是基于此,选择RiboGreen作为核酸染料来检测RNA浓度。首先检测LNP-RNA溶液中游离在LNP颗粒外的RNA数...
实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...
1.1RNA-LNP包封率(Encapsulationefficiency,EE):包裹在脂质纳米粒内部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。 1.2 RiboGreen检测RNA原理:RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料,当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时,几乎没有荧光活性,与RNA结合时,其荧光活性将增加1000倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激...
实验名称:LNP包封率测定 实验目的: 对制备的LNP包封mRNA的效果进行测定。 实验原理: Quant-iT™RiboGreen®RNA试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂,可检测溶液中1-200 ng的核酸,这种核酸染料无法透过LNP,因此只有游离的未被LNP包载的核酸可以被结合。Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-...