基于抗体的m6A测序方法示意图:MeRIP-seq/m6A-seq、m6A-seq2和m6A-CLIP/miCLIP。 抗体非依赖性m6A测序方法示意图:m6A SEAL-seq、m6A SAC-seq、Nanopore DirectRNA-seq和GLORI-seq。 (2)抗体非依赖性测序技术 基于抗体的m6A高通量测序技术存在明显的缺点:m6A抗体质量不易控制,使用不同制造商的抗体获得结果差异较大。
基于抗体的m6A测序方法示意图:MeRIP-seq/m6A-seq、m6A-seq2和m6A-CLIP/miCLIP。 抗体非依赖性m6A测序方法示意图:m6A SEAL-seq、m6A SAC-seq、Nanopore Direct RNA-seq和GLORI-seq。 (2)抗体非依赖性测序技术 基于抗体的m6A高通量测序技术存在明显的缺点:m6A抗体质量不易控制,使用不同制造商的抗体获得结果差异较...
m6A-SEAL-seq所需初始RNA量很低,FTO具有很强大的去甲基化活性,几乎没有序列选择性。m6A-SEAL-seq的缺点是操作步骤多、耗时长、分辨率与MeRIP-seq相似。 选择性丙烯基化学标记测序(m6A-SAC-seq)可以直接标记m6A,覆盖几乎所有m6A经典motif,并以单碱基分辨率定量分析捕获的m6A位点。该方法使用特定酶将烯丙基化学基团添...
基于抗体的m6A测序方法示意图:MeRIP-seq/m6A-seq、m6A-seq2和m6A-CLIP/miCLIP。抗体非依赖性m6A测序方法示意图:m6A SEAL-seq、m6A SAC-seq、Nanopore Direct RNA-seq和GLORI-seq。 (2)抗体非依赖性测序技术 基于抗体的m6A高通量测序技术存在明显的缺点:m6A抗体质量不易控制,使用不同制造商的抗体获得结果差异较大。
然后用生物素标记dm6A以富集含有原始m6A的RNA片段。对富集的RNA进行测序以获得m6A位点信息(图1B)。m6A-SEAL-seq所需初始RNA量很低,FTO具有很强大的去甲基化活性,几乎没有序列选择性。m6A-SEAL-seq的缺点是操作步骤多、耗时长、分辨率与MeRIP-seq相似。
FTO辅助的m6A选择性化学标记方法(m6A-SEAL-seq)利用去甲基化酶FT的特性,在体外对m6A进行标记。FTO用于将m6A氧化为中间产物hm6A,hm6A进一步与二硫苏糖醇(DTT)转化为稳定的N6-二硫代硫醇甲基腺苷(dm6A)。然后用生物素标记dm6A以富集含有原始m6A的RNA片段。对富集的RNA进行测序以获得m6A位点信息(图1B)。m6A-SEAL...
抗体非依赖性m6A测序方法示意图:m6A SEAL-seq、m6A SAC-seq、Nanopore Direct RNA-seq和GLORI-seq。 (2)抗体非依赖性测序技术 基于抗体的m6A高通量测序技术存在明显的缺点:m6A抗体质量不易控制,使用不同制造商的抗体获得结果差异较大。此外,抗体的高价格和测序所需的大量RNA也阻碍其大规模应用。为了克服这些局限,...
m6A-SEAL-seq是一种FTO辅助的m6A选择性化学标记方法,利用去甲基酶FTO的特性在体外标记m6A(Wang等,2020)。FTO用于将m6A氧化为中间产物hm6A,hm6A用二硫苏糖醇(DTT)进一步转化为稳定的N6-二硫甲酰甲基腺苷(dm6A)。然后用生物素标记dm6A,从而能够富集含有原始m6A的RNA片段。对富集的RNA进行测序以获得m6A位点信息(...
图1:高通量m6A测序技术 A. 基于抗体的m6A测序方法示意图:MeRIP-seq/m6A-seq、m6A-seq2和m6A-CLIP/miCLIP。 B. 抗体非依赖性m6A测序方法示意图:m6A SEAL-seq、m6A SAC-seq、Nanopore Direct RNA-seq和GLORI-seq。 (2)抗体非依赖性测序技术 基于抗体的m6A高通量测序技术存在明显的缺点:m6A抗体质量不易控制,使...
FTO辅助的m6A选择性化学标记方法（m6A-SEAL-seq）利用去甲基化酶FT的特性，在体外对m6A进行标记。FTO...