首先,目前普遍采用的mRNA-LNP处方多是通过由阳离子磷脂、DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)、胆固醇、DMPE-PEG2000(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)构建的LNP来实现对mRNA分子的包载。几种磷脂分子发挥各自的功效将mRNA分子包裹在内部形成一个球形的脂质纳米粒,而且通过处方的调整,也可以实现粒径大小不同的LNP制备,详见图1电镜...
对mRNA-LNP结构的分析表明,mRNA、可电离的阳离子脂质和水存在于LNP中,中性辅助脂质主要位于包裹的外壁。mRNA水解是mRNA-LNP不稳定的主要因素。目前尚不清楚LNP中的水如何与mRNA相互作用,以及mRNA的易降解位点通过与可离子化的阳离子脂质的结合而受到多大程度地保护。为了提高mRNA-LNP疫苗的稳定性,首先,应优化mRNA的核...
mRNA疫苗所包封的mRNA会影响终LNP的结构:siRNA 在结构和分子量大小上与 mRNA 有很大不同(表 2)并且N/P(可电离的阳离子脂质与核苷酸磷酸盐)摩尔比不同,N/P摩尔比分别为3和6(表 1)。mRNA 至少比 siRNA 大 100 倍,这会影响 LNP 的结构。此外,有迹象表明 mRNA 位于 LNP 的核,而siRNA 更靠近表面,mRNA 可以...
图1. 不同含量PEG磷脂下mRNA-LNP的粒径大小 (实心圆为mRNA-LNP,空心体为空载的LNP) 随后分别在脂肪细胞和肝细胞上研究不同粒径大小的mRNA-LNP的体外转染效率,详见图2中数据结果所示。首先在mRNA-LNP的摄取上,肝细胞对mRNA-LNP的摄取并未展现出粒径依赖性,而在脂肪细胞上,64 nm的LNP呈现出了较突出的细胞摄取。
Cullis团队本次研究发现,40 mol% ESM LNP配方显著增强了LNP-mRNA系统的体外转染效力和体内循环寿命,并在肝、脾、骨髓细胞中表现出较传统Onpattro配方mRNA表达量的显著增加。 结合之前Cullis团队对囊泡结构LNP的研究可以发现,LNP-mRNA系统整体转染效力的增加很有可能是源于配方、参数变化所导致的LNP结构改变,而不单单...
LNP结构示意图 LNP(脂质纳米颗粒)是mRNA重要的递送系统。LNP通常由阳离子脂质、共轭脂质、非阳离子脂质(胆固醇及中性脂质混合体)及其他赋形剂构成。 两种mRNA COVID19疫苗LNP成分对比 阳离子脂质体:在生产原液时,将mRNA和阳离子脂质体在特定pH值下混合在一起,则阴离...
LNP稳定性 除了mRNA 的完整性外,LNP 的稳定性对于 mRNA-LNP 疫苗的质量也至关重要。目前的mRNA疫苗没有披露关于LNP 稳定性测试的数据,但 Onpattro (patisaran) 的siRNA-LNP 制剂保存在2~8°C 之间时具有三年的有效期,同时该产品不能冷冻保存。 Onpattro 的LNP 系统的组成是:可电离的阳离子脂质DLin-MC3-DM...
作者: 这个LNP结构图很直观,LNP就是mRNA疫苗中的纳米颗粒,负责把mRNA送进细胞里。
1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)是一种临床用于siRNA疗法Onpattro和SARS-CoV-2 mRNA疫苗的LNP中的结构脂质。DSPC的结构由磷脂酰胆碱头部基团和两个饱和的18碳尾部组成,两个尾巴形成紧密堆积的脂质双层。在LNP中,DSPC主要位于纳米粒子表面和在纳米粒核心中的较为边缘位置。1,2二油酰基-sn-甘油-3-磷...
mRNA体外(细胞内)表达也用于分析mRNA的完整性,通过使用编码荧光蛋白的mRNA,可以通过测量荧光信号间接确定mRNA 的完整性。这种方法有助于为生物活性 mRNA-LNP 设计和chu方筛选研究提供指导。或者,可以使用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 或蛋白质印迹技术(WB)来确定编码非荧光抗原的mRNA 的翻译功效。这种方法的优点是它给出...