最近,迈安纳参与系统研究了制备SM102-LNP所用的mRNA水溶液、稀释溶液、超滤溶液和保存溶液的pH值、盐种类和盐浓度对LNPs的理化性质、稳定性及表达效率的影响。研究发现,mRNA水溶液的pH值对LNPs的包封效率和细胞表达影响显著,pH值为4时效果最佳;超滤溶液的pH值对生物分布,尤其是肝脏特异性表达有重要影响;300 mM的蔗糖
首先,目前普遍采用的mRNA-LNP处方多是通过由阳离子磷脂、DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)、胆固醇、DMPE-PEG2000(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)构建的LNP来实现对mRNA分子的包载。几种磷脂分子发挥各自的功效将mRNA分子包裹在内部形成一个球形的脂质纳米粒,而且通过处方的调整,也可以实现粒径大小不同的LNP制备,详见图1电镜...
Peter Cullis团队在针对LNP组分配比的优化过程中发现,高水平辅助脂质配比的LNP-mRNA系统可形成新的独特结构。该结构与上一文章中通过改变可电离阳离子脂质与缓冲液参数形成的囊泡(Bleb)结构有所不同,随着辅助脂质含量增加,LNP-mRNA系统的形态会逐渐从单独的固形核心结构发展为一个围绕更小固形核心的水室双层结构:“...
mRNA疫苗所包封的mRNA会影响终LNP的结构:siRNA 在结构和分子量大小上与 mRNA 有很大不同(表 2)并且N/P(可电离的阳离子脂质与核苷酸磷酸盐)摩尔比不同,N/P摩尔比分别为3和6(表 1)。mRNA 至少比 siRNA 大 100 倍,这会影响 LNP 的结构。此外,有迹象表明 mRNA 位于 LNP 的核,而siRNA 更靠近表面,mRNA 可以...
从几种不同粒径大小的LNP的细胞摄取及蛋白表达情况来看,单纯考虑粒径大小方面的因素,粒径约在60、70 nm的mRNA-LNP相应的细胞摄取及蛋白表达效果最好。但是当然LNP的结构和组成也会起到重要的影响作用,这方面的内容我们下一次会再继续探讨。 参考文献:
提出的LNP-mRNA疗法消除了过度激活的成纤维细胞,以挽救肺纤维化。修复后的ECM环境调节细胞形态。AT2和Pclaf+细胞可塑性的提高通过极化增加了AT1细胞群。Apoe+巨噬细胞和效应T细胞数量增加可重建肺部免疫。因此,LNP-mRNA治疗纤维化可以恢复肺...
除了mRNA 的完整性外,LNP 的稳定性对于 mRNA-LNP 疫苗的质量也至关重要。目前的mRNA疫苗没有披露关于LNP 稳定性测试的数据,但 Onpattro (patisaran) 的siRNA-LNP 制剂保存在2~8°C 之间时具有三年的有效期,同时该产品不能冷冻保存。 Onpattro 的LNP 系统的组成是:可电离的阳离子脂质DLin-MC3-DMA、DSPC、...
这也可以与 mRNA 的二级和三级结构的表征和优化相结合,因为有迹象表明一些折叠结构更为稳定。 本报告是对 mRNA-LNP 疫苗不稳定性背后的因素的文献综述,还指出了规避这些不稳定性因素的解决方案,从而开发出能耐受更高储存温度的mRNA-LNP疫苗,从而解决当前疫苗流通过程所需储存条件苛刻的问题。
在这篇综述中,我们讨论了mRNA-LNP可能的内部结构、影响mRNA-LNP稳定性的因素以及优化mRNA-LNP产品稳定性的策略。对mRNA-LNP结构的分析表明,mRNA、可电离的阳离子脂质和水存在于LNP中,中性辅助脂质主要位于包裹的外壁。mRNA水解是mRNA-LNP不稳定的主要因素。目前尚不清楚LNP中的水如何与mRNA相互作用,以及mRNA的易降解...
LNP结构示意图 LNP(脂质纳米颗粒)是mRNA重要的递送系统。LNP通常由阳离子脂质、共轭脂质、非阳离子脂质(胆固醇及中性脂质混合体)及其他赋形剂构成。 两种mRNA COVID19疫苗LNP成分对比 阳离子脂质体:在生产原液时,将mRNA和阳离子脂质体在特定pH值下混合在一起,则阴离...