细胞内表达的GFP-LC3-RFP-LC3ΔG融合蛋白经Atg4内肽酶加工，断裂成GFP-LC3和RFP-LC3ΔG，后者缺乏与膜结合所需的C末端甘氨酸。GFP-LC3和RFP-LC3ΔG分别充当自噬底物和内对照。GFP-LC3相对于RFP-LC3ΔG的比值与自噬强弱呈负相关。这种方法可以使用流式细胞仪或荧光酶标仪检测自噬。2.3.4 Keima Keima是一种独...
自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品，当细胞内没有自噬发生时，荧光-LC3融合蛋白会均匀地分散在细胞质中，一旦细胞发生自噬活动，荧光-LC3融合蛋白就会聚集并转位到自噬体膜，此时在荧光显微镜下可清晰地观察到...
LC3-GFP质粒的构建通常是将LC3基因与GFP基因连接在一起,然后将其插入到适当的载体中,如质粒。具体步骤如下: 从细胞中提取LC3基因和GFP基因的DNA序列。 将LC3基因和GFP基因连接在一起,形成LC3-GFP融合基因。 将LC3-GFP融合基因插入到适当的载体中,如pEGFP-C1质粒。 将构建好的LC3-GFP质粒进行测序,确保序列正确无...
TagRFP-LC3 可识别从吞噬细胞到自噬体的自噬结构，在雷帕霉素处理的 MEFs 中DALGreen标记了61.8%的TagRFP-LC3点（自噬溶酶体阶段），其余的TagRFP-LC3点被认为是吞噬细胞和自噬体。DAPRed探针标记了65.7%的GFP-LC3点（吞噬体、自噬小体和自噬溶酶体）。其余的 GFP-LC3 点被认为是早期吞噬体。CQ（或 BafA1）...
以下是mRFP-GFP-LC3自噬评判标准: 自噬囊泡膜的形成:正常情况下,细胞内的mRFP-GFP-LC3表达时呈现为一个均匀分布的绿色荧光信号。当自噬过程发生时,mRFP-GFP-LC3会在囊泡膜上形成点状或环状的荧光信号。观察细胞中是否出现这些点状或环状的信号,可以评判自噬囊泡膜的形成。 自噬囊泡膜的积累:正常情况下,自噬囊泡...
自噬双标腺病毒(mRFPGFPLC3)使用指南1404.pdf,. 自噬双标腺病毒〔mRFP-GFP-LC3〕使用指南 背景: 自噬是细胞内的一种 “自食〔Self-eating〕〞的现象,凋亡是 “自杀 〔Self-killing〕〞的现象,二者共用相同的刺激因素和调节蛋白,但 是诱发阈值和门槛不同,如何转换和协调
利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了GFP-LC3指示技术: 无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中; 自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。
mrfp-gfp-lc3 是一种用于检测自噬过程的荧光报告系统,由 mRFP-GFP 融合蛋白和 LC3 蛋白组成。mRFP-GFP 融合蛋白能够反映自噬泡的融合过程,LC3 蛋白则可以作为自噬体的标志物。mrfp-gfp-lc3 自噬评判标准是基于这一荧光报告系统,通过对细胞内 mRFP 和 GFP 信号的动态变化以及 LC3 puncta 的形成来评估自噬的活性和...
mRFP-GFP-LC3是研究细胞自噬最常用的工具之一，在mRFP-GFP-LC3的基础上汉恒生物研发出了AAV-LC3工具，可实现在体自噬监测。后续还研发出了可定位细胞器的自噬研究工具，其原理是用细胞器-RFP（红光）和LC3-GFP（绿光）分别标记细胞器和自噬小体，实现两者的共定位，例如线粒体定位的RFP（mito-RFP）、高尔基体...
分析GFP-Lc3和GFP-Gabarap转基因 斑马鱼胚胎中的自噬活动 摘要: 自噬可介导大量胞内组分在溶酶体中的降解。在动物胚胎发育过程 中,卵黄蛋白的迅速降解和受精卵蛋白的合成导致胞内各结构的成型和细胞的分 化。斑马鱼是一种用来研究自噬的很独特的系统——部分是因为相对于其它生 物,斑马鱼的胚胎发育迅速。斑马鱼在技术...