由于分子生物学的发展,现在已经诞生了mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系,用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是稳定的荧光表达基团,不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP...
mRFP-GFP-LC3是一种常用于研究自噬的双荧光蛋白标记物,可以用于评估自噬过程。以下是mRFP-GFP-LC3自噬评判标准: 自噬囊泡膜的形成:正常情况下,细胞内的mRFP-GFP-LC3表达时呈现为一个均匀分布的绿色荧光信号。当自噬过程发生时,mRFP-GFP-LC3会在囊泡膜上形成点状或环状的荧光信号。观察细胞中是否出现这些点状或环状...
结论: 双荧光 mRFP-eGFP-LC3 体系优于单荧光 GFP-LC3 体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映 细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。 【期刊名称】贵阳医学院学报 【年(卷),期】2015(040)010 【总页数】4 【关键词】[关键词] 雷帕霉素; 自噬; 人胚肾细胞; LC3; 单荧光 GFP-LC3 质粒;...
结论 :双荧光 mRFP—eGFP.LC3 体系优于单荧光 GFP—LC3 体系 ,更能全 面完整地反 映细胞 自噬水 平 ,能够反 映细胞 内 自噬流的变化 ,是 自噬定量分析 的可靠方法 。 [ 关键词] 雷帕霉素;自噬;人胚肾细胞;LC3;单荧光 GFP.LC3质粒;双荧光mRFP—eGFP—LC3 [ 中图分类号] R34—33 [ 文献标识码] ...
▲单箭头:自噬小体;双箭头:自噬溶酶体; Part.02 双荧光穿梭质粒系统检测 自噬形成时,mRFP-GFP-LC3质粒转移至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色或黄色荧光斑点。 当自噬溶酶体形成后,酸性环境使GFP荧光淬灭,GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶...
目的:探讨双荧光mRFP-eGFP-LC3(ptfLC3)体系在细胞自噬中的作用.方法:采用不同浓度雷帕霉素(50,100,200,500,1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-eGFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素...
mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP用于标记与追踪LC3,GFP的减弱可指示 溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP荧光蛋白对酸 性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭,此时只能检测 到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了细
mrfp-gfp-lc3 是一种用于检测自噬过程的荧光报告系统,由 mRFP-GFP 融合蛋白和 LC3 蛋白组成。mRFP-GFP 融合蛋白能够反映自噬泡的融合过程,LC3 蛋白则可以作为自噬体的标志物。mrfp-gfp-lc3 自噬评判标准是基于这一荧光报告系统,通过对细胞内 mRFP 和 GFP 信号的动态变化以及 LC3 puncta 的形成来评估自噬的活性和...
[关键词]雷帕霉素;自噬;人胚肾细胞;LC3;单荧光GFP—LC3质粒;双荧光mRFP—eGFP—LC3 [中图分类号]R34—33[文献标识码]A[文章编号]1000.2707(2015)10.1029-04 theEffectofDual-FluorescencemRFP·-eGFP-LC3in Evaluating Autophagy HUANG Bin,LIUBenrong,LIUShaojun Zhenjun,LIU InstituteCardiovascularSecond (Departmen...
优点:mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株可以稳定持续的表达mRFP-EGFP-LC3,能够有效地解决瞬转实验的效率低、周期长、操作繁琐、不稳定等问题,有利于保证实验结果稳定性与可重复性。 mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系的出现,把自噬研究带入了一个新的阶段,自噬不再只是指标,而是一种机制,自噬流的顺畅与否,对于细胞生理功能的...