评估自噬水平:LC3-II是自噬体膜上的标志性蛋白,而LC3-I是LC3的未修饰形式。因此,LC3-II/LC3-I比值的大小可以反映细胞内自噬体的数量,进而评估细胞自噬的活跃程度。比值越高,通常意味着自噬水平越高。 监测自噬动态变化:由于LC3-I和LC3-II存在一个生成-降解的动态过程,因此通过监测这一比值的变化,可以了解细胞自...
自噬过程中,LC3-I在Atg7和Atg3作用下(和泛素修饰过程很像),与磷脂酰乙醇胺共价结合,LC3-I 被脂质化为 LC3-II,结合在自噬体膜上。LC3-Ⅱ常用作自噬形成的标识物,也是一种重要的定位于自噬胞膜上的多信号传导调节蛋白。LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的...
Western Blot检测LC3表达量 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价细胞自噬形成。细胞自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计细胞自噬水平的高低。 图1. WB检测LC3和p62蛋白表达示意图 (Yoshii, S.R. and N. Mizushima. Int...
抗体选择:目前大部分LC3抗体选择的抗原位于N端,PE基团的加入可能会使得N端蛋白构象变化,导致抗体对LC3的亲和力增强,所以LC3-II条带深并不能代表该样本处于高自噬状态。 冻融敏感性:LC3-II对冻融比较敏感,容易在SDS上样缓冲液降解。因此,在做半定量检测时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也可以配合使用LC3-II与...
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益于荧光蛋白技术的发展，我们可以通过荧光蛋白标记的方式，直观的看到自噬现象和过程。自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品...
目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端,由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化,使得抗体对LC3-II的亲和性更高,所以LC3-II条带显色深并不能代表该样本处于高自噬状态。 在半定量时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也有科学家使用LC3-II与管家蛋白(Housekeeping Protein)的比值进行半定量。 图5 CST LC3...
但是又有一个问题,这个结果表明自噬参与了吗?师兄说一般LC3-II条带深可以表明自噬程度高,可以通过扫描条带的灰度,计算LC3-II/LC3-I表示自噬的水平。有时因为LC3-I条带较浅,LC3-II/LC3-I的比值存在较大的误差,因此也有科学家用LC3-II与内参的比值进行半定量,综合考察。
自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价细胞自噬形成。细胞自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计细胞自噬水平的高低。 图1. WB检测LC3和p62蛋白表达示意图 (Yoshii, S.R. and N. Mizushima. Int J Mol Sci, 2017.) ...
目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端,由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化,使得抗体对LC3-II的亲和性更高,所以LC3-II条带显色深并不能代表该样本处于高自噬状态。 在半定量时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也有科学家使用LC3-II与...