线粒体自噬时,内质网膜包裹损伤的线粒体形成自噬体,此时LC3-I蛋白被修饰形成LC3-II蛋白,LC3-II蛋白促使自噬体与溶酶体融合,完成损伤的线粒体降解。研究人员选取
LC3-II/LC3-I比值的意义: 由于LC3-II是自噬体膜上的标志性蛋白,而LC3-I是其前体形式,因此LC3-II/LC3-I的比值可以反映细胞自噬水平的高低。当细胞自噬活性增强时,更多的LC3-I被转化为LC3-II,导致比值升高;反之,当自噬活性降低时,比值也会相应下降。因此,这一比值成为评估细胞自噬程度的重要指标。 LC3-II/LC3...
在半定量时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也有科学家使用LC3-II与管家蛋白(Housekeeping Protein)的比值进行半定量。 图5 CST LC3A/B Antibody #4108 LC3的条带数与样品本身有关。有的细胞系检测到的可能就只有一条带,即使是同一细胞系,细胞状态不同,样本上样量不同,曝光时间不同等因素都会导致只能看到一...
自噬过程中,LC3-I在Atg7和Atg3作用下(和泛素修饰过程很像),与磷脂酰乙醇胺共价结合,LC3-I 被脂质化为 LC3-II,结合在自噬体膜上。LC3-Ⅱ常用作自噬形成的标识物,也是一种重要的定位于自噬胞膜上的多信号传导调节蛋白。LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的...
利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价细胞自噬形成。细胞自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计细胞自噬水平的高低。 图1. WB检测LC3和p62蛋白表达示意图 (Yoshii, S.R. and N. Mizushima. Int J Mol Sci, 2017.) ...
但是又有一个问题,这个结果表明自噬参与了吗?师兄说一般LC3-II条带深可以表明自噬程度高,可以通过扫描条带的灰度,计算LC3-II/LC3-I表示自噬的水平。有时因为LC3-I条带较浅,LC3-II/LC3-I的比值存在较大的误差,因此也有科学家用LC3-II与内参的比值进行半定量,综合考察。
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益于荧光蛋白技术的发展，我们可以通过荧光蛋白标记的方式，直观的看到自噬现象和过程。自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品...
因此,LC3-II/LC3-I的比值可估计自噬水平的高低。然而,需要注意以下几点: 抗体选择:目前大部分LC3抗体选择的抗原位于N端,PE基团的加入可能会使得N端蛋白构象变化,导致抗体对LC3的亲和力增强,所以LC3-II条带深并不能代表该样本处于高自噬状态。 冻融敏感性:LC3-II对冻融比较敏感,容易在SDS上样缓冲液降解。因此,...
自噬形成过程是LC3II转化为LC3I,那II/I比值越大不应该说明自噬水平越高吗,为什么II/I越大反而是自噬水平受到抑制了呢?谢谢回答 2021-11-20 回复3 郁可唯 自噬形成过程是LC3I转化为LC3II 2022-04-10 回复11 jiyu LC3II/I比值越大自噬水平是越高的,BafA1只是抑制了自噬后期,也就是溶酶体对...
基于以上两个原因,在半定量时,除了使用 LC3-II/LC3-I 的比值外,也有科学家使用 LC3-II 与管家蛋白(Housekeeping Protein)的比值进行半定量。 4.LC3是膜相关蛋白,在细胞裂解后,对其进行冰上短暂超声,促进蛋白的溶解,将 LC3 从膜上解离。LC3-I 和 LC3-II 是小分子蛋白,虽然理论上LC3II分子量更大,由于带负电...