LC3-GFP质粒的构建通常是将LC3基因与GFP基因连接在一起,然后将其插入到适当的载体中,如质粒。具体步骤如下: 从细胞中提取LC3基因和GFP基因的DNA序列。 将LC3基因和GFP基因连接在一起,形成LC3-GFP融合基因。 将LC3-GFP融合基因插入到适当的载体中,如pEGFP-C1质粒。 将构建好的LC3-GFP质粒进行测序,确保序列正确无...
gfp-lc3质粒转染细胞步骤 一、实验步骤: 实验步骤分为四个环节,依次是:接种细胞,准备gfp-lc3 DNA,脂质体复合物,共培养,检测转染效率。 1、接种细胞: (1 )细胞悬液浓度调整为1-2 x 105备用,取六孔板置于超净台面上,每孔接种细胞悬液2ml ,培养过夜。 (2 )观察细胞状态:细胞形态均一, 边界清晰,密度达到...
gfp-lc3单荧光实验方法 GFP-LC3(绿色荧光蛋白-LC3)单荧光实验方法用于研究细胞自噬过程,以下是一种常用的实验方法: 材料: 1. GFP-LC3表达质粒 2.哺乳动物细胞系(如HEK293细胞) 3. PBS缓冲液 4. HEPES缓冲液 5.离心管 6.细胞培养培养基 7.离心机 8.荧光显微镜 步骤: 1.将GFP-LC3表达质粒转染至哺乳动物...
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将GFP-LC3质粒转染入目的细胞,24小时后就可用荧光显微镜进行活体动态观察。正常牛理环境下,LC3在胞质内弥散分布。自噬激活时,LC3-Ⅱ聚集于自噬体膜上。通过转染GFP-LC3融合蛋白的表达,理论上,根据GFP荧光颗粒聚集的密集程度和分布可反映Lc3的表达水平和细胞内定位,因此可以判断细胞自噬的发生情况。如图5-7-5所示,...
单荧光质粒系统检测 利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了GFP-LC3指示技术: 无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中; 自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。
长沙赢润生物技术有限公司 Changsha Yingrun Biotechnology Co.,Ltd pCDNA3.1-GFP-LC3 说明书 产品信息 货号 VXY0542 载体名称 pCDNA3.1-GFP-LC3 出品公司 质粒用途 原核抗性 真核抗性 YRgene 细胞自噬检测载体 Amp+ Neo+ 质粒图谱 载体简介 (1) (2) (3) (4) (5) (6) 此载体为细胞自噬检测载体,可用于...
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