摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...
中国试剂级别: 分子生物学级代理, RFPGFPLC3英文名称: RFPGFPLC3价格 报价,null 产品货号: 4371价格 报价
产品名称:P1333/pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒原核抗性: 氨苄青霉素Amp筛选标记: 嘌呤霉素Puro克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3培养条件: 37℃,LB特点:是染色质外的双链共价闭合环形DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),可自然形成超螺旋结构,不同质粒大小在2-300kb之间,<15kb的小质粒比较容易分离纯化...
方法 构建含 RFP-GFP-LC3 基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染 HEK293T 细胞,收集病毒上清后感染 RAW264. 7 细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察 RFP-GFP-LC3 斑点。结果 ...
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自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
本实验中, 稳定表达 RFP-GFP-LC3 质粒的大鼠胰岛细胞株的成功构建不仅解决了传统自噬检测手段——— 细胞免疫荧光技术需要相应一抗/二抗的孵育、实验成本较大、步骤繁琐耗时的缺点 [24] ,而且为自噬在糖尿病的相关研究提供了细胞平台, 有利于自噬相关机理药物在胰岛 β 细胞上的高通量筛选, 为糖尿病药物的开发...
本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1细胞，通过共聚焦显微镜观察发现(图A)，1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了...
质粒名称: pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG 出品公司: Addgene 目录编号: 84572 存储实验室: Noboru Mizushima 载体骨架基本信息 载体名称: pMRX-IP 载体出品公司: -- 载体抗性: 氨苄青霉素 空载体大小: 6100 bp 完整质粒大小: 8300 bp 载体修饰: -- 载体类型: 哺乳动物表达,逆转录病毒 筛选标记: 嘌呤霉素 ...
当自噬体与溶酶体未发生融合时,RFP荧光和GFP荧光都是存在的,当自噬体与溶酶体发生融合时,导致GFP淬灭,此时只能观察到红色荧光 ②GFP-LC3单荧光标记 利用了LC3在自噬形成时聚集的原理,即无自噬时,GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中 ③MDC染色 MDC是一种嗜酸性的荧光色素,由于能使所有的酸性泡着色,故为非特异性染色...