如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2 小时后出现明显增强的自噬以及自噬流(通过merge后的红色小点明显增多可以判定自噬流水平升高)。 Antioxid Redox Signal 14(11): 2179-2190. 实验操作注意事项 1、操作病毒时请尽量使用生物安全柜;? 2、操作时需戴上帽子,佩戴双层手套,双层口罩;? 3、病毒操作中
即将VSVG质粒、Δ8.9质粒、RFP-GFP-LC3质粒进行质量浓度1︰1︰1的共转染,转染完成后将细胞置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h。到达时间后,于倒置荧光显微镜下观察转染效率,并收集细胞上清液,3000r/min离心10min,去除残余的293FT细胞杂质,即得到已包装好RFP-GFP-LC3质粒的慢病毒颗粒。 1.4稳定细胞株的筛选 转染...
自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过D...
Methods : Adult CAG-RFP-GFP-LC3 mice were maintained under standard 12 h:12 h cyclic light/dark conditions, and were selected by PCR tail snip analysis. A GFP reporter mouse line served as a positive control for GFP expression. Eyes were enucleated, fixed, and cryosections were obtained ...
自噬双荧光标记慢病毒吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒，可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是稳定的荧光表达基团，不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境，导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱表明溶酶体与...
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产品名称:pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG质粒 产品规格:质粒干粉 如需该质粒图谱可以联系客服索取 受各种因素影响,我们只保证质粒的关键序列测序正确,不能保证实验效果。请您收到质粒后请务必先转化,再挑取单菌落扩增,不要直接使用。如果您需要即用的大包装质粒或病毒颗粒,可委托我们制备,性价比更高。 pMRX-IP-GFP...
稳定表达RFP-GFP-LC3的大鼠胰岛β细胞株的构建 为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚... 周佳丽,吴艳阳,罗玉霜,... - 《生命科学研究》 被引量: 0发表: 2019年 氧化应激在LPS诱导...
价格:1200元 联系方式:I47-825O-882O 相关技术服务:质粒构建 基因合成 质粒大提立刻购买 买家导航 pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体质粒基本信息 质粒名称: pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG 出品公司: Addgene 目录编号: 84572 存储实验室: Noboru Mizushima 载体骨架基本信息 载体名称: pMRX-IP 载体出品公司...