如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2 小时后出现明显增强的自噬以及自噬流(通过merge后的红色小点明显增多可以判定自噬流水平升高)。 Antioxid Redox Signal 14(11): 2179-2190. 实验操作注意事项 1、操作病毒时请尽量使用生物安全柜;? 2、操作时需戴上帽子,佩戴双层手套,双层口罩;? 3、病毒...
参考报价:面议 品牌:纽赫生物 产地:上海 型号:RFP-GFP-LC3自噬双标质粒 样本: 纽赫生物科技(上海)有限公司 获取底价 在线客服 查看同类文库/载体构建仪器 型号品牌PIPES指数仪器相关信息 仪器描述 最新仪器 标准 口碑 仪器描述 RFP-GFP-LC3自噬双标质粒 RFP-GFP-LC3自噬双标质粒,RFP-GFP-LC3自噬双标质粒 ...
RIN-m5f细胞株为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株.无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降, P62...
即将VSVG质粒、Δ8.9质粒、RFP-GFP-LC3质粒进行质量浓度1︰1︰1的共转染,转染完成后将细胞置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h。到达时间后,于倒置荧光显微镜下观察转染效率,并收集细胞上清液,3000r/min离心10min,去除残余的293FT细胞杂质,即得到已包装好RFP-GFP-LC3质粒的慢病毒颗粒。 1.4稳定细胞株的筛选 转染...
如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。 红色斑点是自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点是自噬体(RFP+GFP). 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱,实时监测自噬发生过程,准确,清晰,直观! 参考文献 1、Histone deacetylase 4 selectively contributes to podocyte...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
方法 构建含 RFP-GFP-LC3 基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染 HEK293T 细胞,收集病毒上清后感染 RAW264. 7 细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察 RFP-GFP-LC3 斑点。结果 ...
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG...
自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
到达时间后, 于倒置荧光显微镜下观察转染效率, 并收集细胞上清液, 3 000 r/min 离心 10 min,去除残余的 293FT 细胞杂质, 即得到已包装好RFP-GFP-LC3 质粒的慢病毒颗粒。 1.4稳定细胞株的筛选 转染前一天, 将 RIN-m5f 用 0.25% EDTA 胰酶进行消化, 种入 6 孔板中。用含 10% FBS 的1640 培养基培养 24...