图1.使用 JC-1 对 NIH 3T3 成纤维细胞进行染色,结果显示在暴露过氧化氢后,红色J聚集物的荧光逐渐消失,单体的绿色荧光在细胞质中扩散。图像显示H2O2处理前和处理后 5、10 和 20分 钟时的相同细胞位置。 JC-1...
JC-1是一种荧光亲脂性羰花青染料,用于测量线粒体膜电位。 线粒体膜电位较高时, JC-1 在基质中汇聚形成聚合物 (J-aggregates),可以产生红色荧光 (Ex/Em=585/590 nm);线粒体膜电位较低时,JC-1 不能聚集在线粒体基质中,以单体形式存在产生绿色荧光 (Ex/Em=510/527 nm)。这样就可以非常方便地通过荧光...
JC-1 形成带有红色荧光的聚集体(在健康的线粒体中)。 随着膜电位的降低,JC-1 变成单体,呈绿色荧光。 红绿荧光比例的变化被用作线粒体状况的指标。 JC-1线粒体膜电位荧光探针染色步骤(流式细胞仪法): 1. 于6-,12或24-孔板上进行细胞铺板,密度为5×105 cells/mL。37℃,5% CO2培养箱培养过夜。选择合适...
当在490nm处激发时,JC-1发生从绿色到橙绿色的可逆改变,因为线粒体膜极化的更大。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到,因此绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析,橙绿色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。JC-1主要的优点是,它既可以进行定性检测,通过其发射荧光的颜色从绿...
对于大多数细胞,通常10μM CCCP处理20分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关 文献资料决定。3. 对于悬浮细胞: (1)取10~60万细胞,重悬于0.5mL细胞培养液中,细胞...
b.5倍稀释的JC-1染色工作液中加入总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。c.用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描,激发波长为485nm,发射波长为590nm。d.用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤6。6、荧光观测和结果分析:检测JC-1单体时可以把激发光设置为490...
细胞凋亡早期:JC-1染色(线粒体膜电位变化的检测) 在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏,这被广泛认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光...
在JC-1染色分析中,X轴(FL1-H)通常表示绿色荧光强度,Y轴(FL2-H)通常表示红色荧光强度。根据图...
掌握JC-1实验的每一步至关重要。首先,我们需要配制精确的JC-1染色工作液,为细胞提供所需的荧光环境。在阳性对照中,通过加入CCCP观察线粒体膜电位的丧失,为实验提供标准。悬浮细胞的操作流程包括细胞悬液的制备、染色、离心洗涤以及荧光观察,每一个环节都需要细心处理,以确保结果的准确性。注意事项,...