1.样品准备 1) 可选择与您研究材料相匹配的标准操作流程进行细胞裂解。Tip 1：高浓度的去垢剂会干扰免疫沉淀效果。所以可先用小体积RIPA（Cat No. PR20001）裂 解细胞制备蛋白裂解物，在开始IP捕获前，再补加1 X PBS（Cat No. PR20023）或孵育 液稀释到需要的体积。Tip 2：使用足量的蛋白裂解物：单管IP...
4. 取50ul为Input阳性对照,剩余蛋白液用于与抗体孵育反应。 三、IP 1. 实验材料:抗体、磁珠 2. 抗体包被磁珠(提取蛋白前) 1) 磁珠洗涤:2个1.5 mL EP管中分别加入30 µL磁珠,PBS + 0.5%Triton洗涤磁珠,磁力架磁性分离,共洗3次; 2) 磁珠重悬: 400 µL PBS + 0.5%Triton重悬磁珠; 3) 包被抗体:2...
先将IP抗体与裂解物进行孵育(4℃翻转孵育过夜),一段时间后再加入beads进行孵育(4℃旋转2-4小时)。 实验要点: 应选用适合IP的抗体,可查找文献报道或厂家IP验证。IgM和IgA类的单抗不太适合做IP,因为其结合韧性比较差,不和protein A或者G结合。 如果捕获带标签的融合蛋白,推荐使用Nano-Trap系列产品,纳米抗体偶联琼...
这是一份关于蛋白互作IP实验(免疫共沉淀及WB)的操作分享是IP实验的第八步~裁膜及一抗孵育!内含保姆级步骤讲解~助力每一个生物学小白!如果帮到你,也请三连支持欧~, 视频播放量 1736、弹幕量 0、点赞数 40、投硬币枚数 16、收藏人数 108、转发人数 11, 视频作者 奇迹柳儿
1.加样时,Input和IP组样品不要溢样至IgG组。 2.IP与CoIP实验的成功还需要对照的佐证一般IP实验需要设置Input组(阳性对照),IP实验组,IgG组(阴性对照) ●Input组:5%-10% ●IP组:(质量比)1:20-1:100 ●IgG组:与IP同型对照 举个例子:若用200 μg样品进行IP,Input组上样10-20 μg蛋白进行电泳转膜;IP...
二、IP实验流程。 1. 细胞裂解。 这个就像是把装着小娃娃们(蛋白)的房子给拆了一样。我们要先把细胞收集起来,然后加入裂解液。这个裂解液就像是一把魔法钥匙,它能打开细胞的大门,把里面的蛋白都释放出来。不过这过程得小心点儿呢,就像拆房子不能太暴力,不然会把蛋白弄坏的。我们要选择合适的裂解液,比如有些细...
一、细胞转染 实验材料包括Lipo8000转染试剂与DMEM培养基。转染前，将细胞培养皿中换入新鲜完全培养基（含血清与抗生素）。随后制备转染混合物，逐滴加至10cm皿内，轻轻搅拌均匀。24小时后收集蛋白。二、蛋白提取(抗体包被期间提取)清洗培养皿，去除培养液，使用PBS清洗一次。加入裂解液（按比例添加蛋白酶...
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。, 视频播放量 94、弹幕量 0、点赞数
免疫沉淀实验(IP,immunoprecipitation)结合免疫印迹(WB,Western Blot),是目前研究和验证蛋白质-蛋白质相互作用的一种重要实验方法。本文将介绍IP-WB的实验流程并为大家解析常见的理想结果和异常结果。 1.IP-WB的实验过程 经典的IP-WB实验通常包括以下主要步骤:首先以较温和的裂解液从细胞或组织中提取得到蛋白溶液,然后...
IP/Co-IP 17600235 Immunoprecipitation Starter Pack IP/Co-IP ▶免疫沉淀实验 在保证蛋白样品质量,并正确选择抗体与填料(Protein A/G Sepharose)后,即可开始进行免疫沉淀实验。首先需要利用抗体与填料的结合,将靶蛋白免疫沉淀下来。在这一步骤中,可先将抗体与靶蛋白孵育结合后,再与填料孵育将抗体-靶蛋白复合...