免疫沉淀实验步骤及要点 1)样本制备 2)对照设置 3)Lysate预处理 4)目的蛋白免疫沉淀 5)beads清洗 6)洗脱 7)目的蛋白检测 常见问题解析 Lysate预处理是必须得步骤吗? 抗体捕获beads怎么选择? WB检测抗体和二抗如何选择可以避免重轻链干扰? IP金牌伴侣6.5折限时促销 免疫沉淀(IP)实验是研究蛋白的重要技术。此前小P...
1.样品准备 1) 可选择与您研究材料相匹配的标准操作流程进行细胞裂解。Tip 1：高浓度的去垢剂会干扰免疫沉淀效果。所以可先用小体积RIPA（Cat No. PR20001）裂 解细胞制备蛋白裂解物，在开始IP捕获前，再补加1 X PBS（Cat No. PR20023）或孵育 液稀释到需要的体积。Tip 2：使用足量的蛋白裂解物：单管IP...
4. 取50ul为Input阳性对照,剩余蛋白液用于与抗体孵育反应。 三、IP 1. 实验材料:抗体、磁珠 2. 抗体包被磁珠(提取蛋白前) 1) 磁珠洗涤:2个1.5 mL EP管中分别加入30 µL磁珠,PBS + 0.5%Triton洗涤磁珠,磁力架磁性分离,共洗3次; 2) 磁珠重悬: 400 µL PBS + 0.5%Triton重悬磁珠; 3) 包被抗体:2...
这是一份关于蛋白互作IP实验(免疫共沉淀及WB)的操作分享是IP实验的第八步~裁膜及一抗孵育!内含保姆级步骤讲解~助力每一个生物学小白!如果帮到你,也请三连支持欧~, 视频播放量 1736、弹幕量 0、点赞数 40、投硬币枚数 16、收藏人数 108、转发人数 11, 视频作者 奇迹柳儿
一、细胞转染 实验材料包括Lipo8000转染试剂与DMEM培养基。转染前，将细胞培养皿中换入新鲜完全培养基（含血清与抗生素）。随后制备转染混合物，逐滴加至10cm皿内，轻轻搅拌均匀。24小时后收集蛋白。二、蛋白提取(抗体包被期间提取)清洗培养皿，去除培养液，使用PBS清洗一次。加入裂解液（按比例添加蛋白酶...
免疫沉淀实验(IP,immunoprecipitation)结合免疫印迹(WB,Western Blot),是目前研究和验证蛋白质-蛋白质相互作用的一种重要实验方法。本文将介绍IP-WB的实验流程并为大家解析常见的理想结果和异常结果。 1IP-WB的实验过程 经典的IP-WB实验通常包括以下主要步骤:首先以较温和的裂解液从细胞或组织中提取得到蛋白溶液,然后加...
IP及COIP实验流程 1.细胞培养(贴壁细胞:100mm细胞培养皿中单层细胞长满80%-90%或者细胞培养瓶中细胞达到2-5×107个,悬浮细胞:离心收集细胞,细胞达到2-5×107个); 2.加1ml冰冷的IP细胞裂解液到细胞培养皿中4℃裂解细胞10min,再用移液器反复吹打贴壁细胞,然后将细胞悬浮液转移到1.5 ml离心管中; 3.用1ml冰...
通过以上的实验操作和结果观察,我们对IP数据报的发送和转发流程有了更加深入的理解。总的来说,IP数据报的发送和转发流程可以概括为以下几个步骤: 1.发送端根据目标IP地址和子网掩码,计算目标IP的网络地址; 2.发送端查询以太网地址(ARP协议),获取目标主机的MAC地址; 3.构建IP数据报,并将其发送到出口接口; 4.路...
1.加样时,Input和IP组样品不要溢样至IgG组。 2.IP与CoIP实验的成功还需要对照的佐证一般IP实验需要设置Input组(阳性对照),IP实验组,IgG组(阴性对照) ●Input组:5%-10% ●IP组:(质量比)1:20-1:100 ●IgG组:与IP同型对照 举个例子:若用200 μg样品进行IP,Input组上样10-20 μg蛋白进行电泳转膜;IP...