说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
2 操作步骤与结果分析Co-IP 实验流程图 2. Co-IP 实验流程图[1][5]。Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1]1样本准备采用适当的方法收集细胞，使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。2固相介质准备将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出，用平衡液清洗磁珠/琼脂糖凝胶。3...
4. 将预处理过的10μl protein A琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h...
co-ip实验原理和步骤 以抗体和抗原之间的特异性结合为基础,利用蛋白质X的抗体将其从细胞裂解液等复杂体系中沉淀下来。如果蛋白质X与蛋白质Y存在相互作用,那么蛋白质Y也会随着蛋白质X一起被抗体-抗原复合物沉淀下来。最后通过蛋白质检测方法,如Western blot等,来验证蛋白质Y是否存在,从而确定蛋白质X和蛋白质Y之间...
免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—诱饵蛋白抗体沉淀诱饵蛋白—SDS-PAGE分离蛋白—WB检测是否存在靶蛋白。免疫共沉淀结果的真实性 验证免疫共沉淀试验结果的真实性主要从下面几点考虑：（1）抗原的沉淀是由本身抗体的结合引起的，单克隆抗体不存在此问题，故建议使用单克隆抗体。（2）确保抗体的...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
实验原理 实验流程 1.培养实验所需细胞2.外源性CO-IP需要转染外源质粒3.细胞裂解（常用RIPA并添加PMSF等酶抑制剂）4.免疫沉淀反应 ①磁珠预处理（protein A/G或HA等标签磁珠）②目标抗体与磁珠结合（一般抗体使用浓度为10-50ug/mL）③抗原沉淀反应（含有抗体的磁珠与细胞裂解液结合）④抗原洗脱（变性和非变性两种...
实验流程 Co-IP方案与传统IP方案非常相似,不同之处在于Co-IP需要更温和的检测条件来维持与结合伙伴的相互作用。接下来以protein A/G琼脂糖珠法为例,介绍基本实验流程: 1.样本制备 离心收集细胞后,加入适量预冷的非变性细胞裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂,冰上静置15-30min,充分裂解细胞,4℃离心后取上清 ...
一般实验流程 1、 样本制备：离心收集细胞后，加入适量预冷的非变性细胞裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂，冰上静置15-30min，充分裂解细胞，4℃离心后取上清；2、 诱饵蛋白抗体孵育：取少量细胞裂解的上清以备western blot分析，其余的上清液加入相应蛋白的抗体（适用于IP），置于4℃摇床孵育过夜。3、 沉淀免疫复合物...
Co-IP(动物)实验原理与操作步骤讲解,手把手教学!, 视频播放量 1608、弹幕量 0、点赞数 51、投硬币枚数 6、收藏人数 185、转发人数 5, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领域