方案三:标签类(Flag,HA,GFP,myc等)IP通过过表达方式,将目标IP蛋白带上Flag,HA,GFP,myc等标签,可极大方便后续的实验检测。 ①可直接选择现成的Flag beads或者磁珠,IP实验会比较容易操作,由于标签抗体非常成熟,IP抗体与WB抗体选择不同种属来源,即可避免轻重链问题。 ②WB选择直接HRP标记的标签抗体(如Flag-HRP mab)...
除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体Y）对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X(抗体Y)。在某些CO-IP实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行蛋白X和蛋白Y的WB检测，该对照组称为output组。免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—...
免疫共沉淀 ( Co-Immunoprecipitation ,Co-IP ) 是一种研究蛋白质间相互作用的重要方法。通过非变性细胞裂解液裂解细胞,可以保留细胞内蛋白质间的相互作用。使用特异性的抗体和agrose beads进行免疫沉淀,可以一起沉淀下存在相互作用的蛋白复合物。通过蛋白变性分离和检测,可以证明这些蛋白具有相互作用。以下是免疫共沉淀...
免疫共沉淀实验大致流程 可分为以下4步 第1步:收集蛋白样品 蛋白样品通常通过裂解细胞得到。 Co-IP实验通常有两种,一种为内源性蛋白相互作用验证,另外一种为非内源性蛋白相互作用验证,内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生,即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达,表达完成后收集细胞进行裂...
📚 Co-IP实验,即免疫共沉淀实验,是研究蛋白质相互作用的重要方法。以下是详细步骤:1️⃣ 取1mg蛋白样品,用裂解液稀释至1ml。2️⃣ 加入40ul protein G agrose和1ug IgG,4℃旋转混合2小时后离心,去除非特异性结合。3️⃣ 加入2ug一抗和40ul protein G agrose,4℃旋转混合过夜。4...
控制对于了解您的实验是否有效并在事情没有完全解决时进行故障排除至关重要。 您可以为 Co-IP 使用多种不同的控件(图 2)。 图2:免疫共沉淀的示例对照 阴性对照 这些控件表明您在实验中看到的任何交互都是有效的。 使用涂有非特异性抗体的珠子,在您的裂解物中孵育并与您的样品一样处理。 最好从与实验中的抗...
co-IP 的结果反映了 体内 。 如果研究人员已经预测到潜在的相互作用物，则 Co-IP 可以与蛋白质印迹分析相结合，作为蛋白质相互作用验证的一种方式。 如果没有做出预测，coip 可以与质谱联用来识别新的相互作用物。 免疫共沉淀CoIP详细实验步骤流程-辉骏生物 内源蛋白抗体免疫共沉淀CoIP实验步骤 标签抗体免疫共沉淀...
🔬 实验流程: 1️⃣ 准备细胞样本,提取蛋白质。 2️⃣ 将抗原与抗体混合,进行免疫沉淀。 3️⃣ 通过SDS-PAGE电泳分离沉淀的蛋白复合物。 4️⃣ 利用Western blot检测目标蛋白的相互作用。📝 注意事项: * 抗体选择要确保高特异性和亲和力。 * 缓冲液成分要精确,以维持蛋白活性。
提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗(或由我公司代购) 注:免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。 基本流程 1. 裂解样品,准备蛋白样品; 2. 准备抗体-Protein A/G beads; 3. 样品,抗体-Protein A/G bends共孵育; 4. ...