首先证实了ANXA1可以被SUMO化,通过Co-IP证实ANXA1能够与SUMO2结合强烈,与SUMO3结合适度,与SUMO1结合微弱,进一步发现SUMO化的ANXA1能够促进NF-κB信号通路重要调节分子IKKα的降解从而抑制NF-κB信号通路,进而抑制IL-1b, IL-6, TNF-α等炎症因子的分泌,从而改善脑缺血后小胶质细胞的过度炎症反应,为脑缺血的治疗提...
CO-IP是用于检测或探究蛋白与蛋白之间相互作用的实验,属于IP实验的扩展,在样品溶液中,捕获和纯化通过天然相互作用及靶标结合的其他大分子蛋白,基于抗原抗体的特异性免疫结合,以饵蛋白为诱饵蛋白,通过饵蛋白抗体捕获,磁珠吸附结合,进而将饵蛋白结合的互作蛋白捕获得到,纯化定量定性分析。 实验操作步骤: 1.样本准备 组织...
去氧胆酸钠(离子去污剂,提取蛋白;用H2O配制成10%储存液;避光保存) 注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。 2. RIPA蛋白酶抑制剂 苯甲基磺酰氟(PMSF)(用异丙醇配制成200 mM的储存液,室温保存) EDTA(钙螯合剂;用H2O配制成100 mM的储存液,PH 7.4) 亮...
Co-IP实验涉及以下步骤：首先，以细胞内源性靶蛋白为诱饵，使用特异性识别靶蛋白的抗体与细胞总蛋白共孵育以形成免疫复合物；随后，加入蛋白A/G（预先结合在琼脂糖凝胶或磁珠上）以捕获与靶蛋白有相互作用的蛋白，形成复合物。通过凝胶电泳分离纯化后，应用Western blot或质谱技术鉴定目标蛋白的结合蛋白或复...
植物科学最前沿-实验方法步骤co ip.pdf,Co-ip protocol 一、 抗体选择 Anti-Myc: M4439, Monoclonal -Myc antibody produced in clone 9E10, purified immunoglobulin, buffered aqueous solution (Sigma) Anti-HA: H3663, Monoclonal Anti-HA antibody produced in mouse c
Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
众所周知，Co-IP是研究蛋白与蛋白相互作用的技术，基于抗体和抗原特异性结合的原理，采用结合了目标蛋白抗体的beads，调取样本中天然结合的目标诱饵蛋白（Bait）及其互作蛋白，去除未结合的蛋白后，再将复合物从beads上洗脱下来，进行后续western-blot或质谱鉴定。由上图可知，免疫沉淀复合物包括：Beads、抗体（约25kD的...
Co-IP免疫共沉淀常见问题及解决方法: 一、实验结果高背景 原因1:制备样品中可能有不完全溶解的大的蛋白复合体 制备样品后进行短暂超声处理(3次,每次5秒钟),然后离心纯化,取上清后进行后续实验 原因2:洗涤不彻底 多次洗涤,并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度 ...
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样品的制备是CO-IP实验的关键步骤之一。确保样品的纯度和完整性对于获得可靠的结果至关重要。在制备样品时,应注意以下几点: 使用高质量的细胞提取缓冲液来裂解细胞并保持蛋白质的完整性。 添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂来防止蛋白质的降解和磷酸化。 使用低温和快速的离心步骤来避免蛋白质的降解和聚集。