(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。 (4)灵敏度没有亲和色谱高。 要求 提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗(或由我公司代购) 注:免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,...
CO-IP免疫共沉淀实验操作详细步骤,实验过程,操作要点,重难点解析 2.4万播放 【研一】-04免疫沉淀IP及免疫共沉淀 COIP 1.3万播放 CO-IP免疫共沉淀实验操作详细步骤 噗啦噗啦实验室 17:21 感动哭II终于有人把QPCR实验一次性说清楚了 噗啦噗啦实验室
1.2Co-IP实验的步骤包括：（1）细胞裂解和共沉淀：将目标蛋白质所在的细胞或组织进行裂解，释放出蛋白质复合物。通过特异性抗体将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质共沉淀，形成复合物。（2）洗涤和离心：通过一系列洗涤步骤，去除非特异性结合的蛋白质，将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质保留在沉淀物中。离心沉淀物，...
当进行CO-IP(共免疫沉淀)实验并使用质谱鉴定产物时,有几个关键的注意事项需要考虑: 1.样品制备: 样品的制备是CO-IP实验的关键步骤之一。确保样品的纯度和完整性对于获得可靠的结果至关重要。在制备样品时,应注意以下几点: 使用高质量的细胞提取缓冲液来裂解细胞并保持蛋白质的完整性。
实验设计分为2部分,1. 是看whole cell lysate(简写WCL)目的是为了证明内源性的蛋白是表达的,同时转染的HA-Ub质粒也是表达的。通常WCL组里也要跑内参β-actin,用以说明每个组(泳道)里的总蛋白量是一样的。2. 是看IP组,因为是用内源性的PKM2的抗体做的co-IP,因此所有泳道都应该有PKM2表达。3. 最后再看HA...
1.2Co-IP实验的步骤包括: (1)细胞裂解和共沉淀:将目标蛋白质所在的细胞或组织进行裂解,释放出蛋白质复合物。通过特异性抗体将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质共沉淀,形成复合物。 (2)洗涤和离心:通过一系列洗涤步骤,去除非特异性结合的蛋白质,将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质保留在沉淀物中。离心沉淀物,去除洗涤...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),简称 Co-IP,其原理是当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来, 如果用蛋白质 X 的抗体 anti-X(通常称为 IP 抗体)将 X 特异地抓住并沉淀下来,那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 或者 Z 等也能共同被沉淀下来。目前多用 ...
3. 样品,抗体-Protein A/G bends共孵育; 4. 洗脱; 5. WB检测。 服务报告内容 WB胶片,PVDF膜,和实验报告。 服务编号服务项目内容说明价格周期 ETS-I01IP提供蛋白样品,做IP和一个WB检测￥6000/蛋白3-4周 ETS-I02Co-IP提供蛋白样品,做Co-IP和2个WB检测￥7000/蛋白3-4周...
作用:(1)测定两种甚至更多种蛋白质是否在体内结合;(2)鉴定一种特定蛋白质的作用搭档;(3)分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 一个成功的 Co-IP 实验,首先得证明靶蛋白 A 和预测的相互作用的蛋白 B存在于蛋白质样品中,所以抽 发布于 2021-11-05 14:53 ...
CO-IP可以分为在目的细胞中的内源性IP和在工具细胞系(一般为293T)的外源性CO-IP。而GST-Pull down可作为在原核生物中表达的蛋白,已经完全脱离了细胞环境,只有真正有相互作用的蛋白才能被拉下来。 免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用...