IP-MS的实验流程如下图所示，包括：（1）材料获取：细胞或组织。（2）蛋白提取：可根据目的蛋白的特性加入不同类型的IP裂解液及抑制剂。如：非磷酸化蛋白可不添加磷酸酶抑制剂；IP背景高，选用裂解度高的裂解液；目的蛋白IP不下来，选用裂解度低的裂解液等。（3）Beads结合抗体孵育：对应的抗体与Beads结合，注意...
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用; (3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。 (4)灵敏度没有亲和色谱高。 要求 提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗(或由我公司代购) 注:免疫共沉淀(co-IP)通常必...
1.可能存在假阳性和假阴性结果，需要进行验证。2.可能存在抗体特异性和亲和力的问题，需要选择合适的抗体和固相材料。3.可能存在样品处理和洗涤步骤中的损失和变异，需要优化实验条件。四、IP和Co-IP技术的应用 IP和Co-IP技术在生物药物领域有广泛的应用，可以用于研究蛋白质相互作用的机制、鉴定新的蛋白质交互作用伙...
1. 抗体需识别诱饵蛋白天然构象,需选择经过IP验证的抗体; 2. 若研究的目的蛋白没有商品化抗体,可对目的蛋白进行基因改造,与标签蛋白融合表达,使用标签抗体进行实验。 三、固相支持物选择——磁珠or琼脂糖珠? 四、孵育顺序——要想得率高,顺序很关键 五、洗脱方式——下游实验不同,洗脱方法不同 ok,今天的分享就...
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白...
3.可能存在样品处理和洗涤步骤中的损失和变异,需要优化实验条件。 四、IP和Co-IP技术的应用 IP和Co-IP技术在生物药物领域有广泛的应用,可以用于研究蛋白质相互作用的机制、鉴定新的蛋白质交互作用伙伴、筛选药物靶点等。以下是一些具体的应用案例: 1.蛋白质复合物的组成和结构分析:通过IP和Co-IP技术,可以分离出蛋...
3.可能存在样品处理和洗涤步骤中的损失和变异,需要优化实验条件。 四、IP和Co-IP技术的应用 IP和Co-IP技术在生物药物领域有广泛的应用,可以用于研究蛋白质相互作用的机制、鉴定新的蛋白质交互作用伙伴、筛选药物靶点等。以下是一些具体的应用案例: 1 .蛋白质复合物的组成和结构分析:通过IP和Co-IP技术,可以分离出...
一、产品优势 ACE rProtein A/G Magnetic IP/Co-IP Kit 是一款能够高效完成免疫沉淀(IP)及免疫共沉淀(Co-IP)实验的试剂盒。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞
普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。服务基本流程 1. 裂解样品,准备蛋白样品; 2. 准备抗体-Protein A/G beads; 3. 样品,抗体-Protein A/G bends共孵育; 4. 洗脱; 5. WB检测。服务报告内容 WB结果和实验报告。
4.溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。 5.去除上清液并洗涤。 升级之后的IP和Co-IP基本步骤: 1.添加合适的抗体偶联物。 2.抗体与目标蛋白结合。 3.溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。 4.去除上清液并洗涤。 你会发现,在这款Abbkine“蛋白利器”的实验过程中,其实是省去了一个耗时而且复杂的抗体与载体结合的实验操作...