提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗(或由我公司代购) 注:免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。 基本流程 1. 裂解样品,准备蛋白样品; 2. 准备抗体-Protein A/G beads; 3. 样品,抗体-Protein A/G bends共孵育; 4. ...
CO-IP免疫共沉淀实验操作详细步骤,实验过程,操作要点,重难点解析 2.4万播放 【研一】-04免疫沉淀IP及免疫共沉淀 COIP 1.3万播放 CO-IP免疫共沉淀实验操作详细步骤 噗啦噗啦实验室 17:21 感动哭II终于有人把QPCR实验一次性说清楚了 噗啦噗啦实验室
蛋白质相互作用是细胞中生物学过程的关键组成部分,对于疾病的发生和发展具有重要作用。为了全面了解蛋白质相互作用网络,并为生物药物研发和治疗策略提供准确的靶点信息,科学家们不断发展改进实验技术。其中,结合Co-IP实验和质谱分析的方法成为了揭示蛋白质相互作用网络的有力工具。本文将详细探讨Co-IP实验质谱揭示蛋白质相...
其中IgG是作为对照组的,但是在co-IP操作中向样品里加了IgG抗体,是进行过IP这个步骤的,因此将IgG对照组放在IP组下方。input的样品是没有经过IP这个步骤,因此单独列为一个泳道。比如在下面这个案例中,左图是input和IP组,IP组下方分为p65的IgG,意思是分别用p65抗体和IgG抗体进行IP。如果p65抗体是鼠源的,那么此时的...
当进行CO-IP(共免疫沉淀)实验并使用质谱鉴定产物时,有几个关键的注意事项需要考虑: 1.样品制备: 样品的制备是CO-IP实验的关键步骤之一。确保样品的纯度和完整性对于获得可靠的结果至关重要。在制备样品时,应注意以下几点: 使用高质量的细胞提取缓冲液来裂解细胞并保持蛋白质的完整性。
实验对照的设置: 一个成功的 Co-IP 实验,首先得证明靶蛋白 X 和预测的相互作用的蛋白 Y 存在于蛋白质样品中,所以抽出来的蛋白样品要直接检测一下 X 和 Y 的存在,这个一般称为 Input。 然后要证明 IP 抗体是不是能拉下来靶蛋白,做完IP后要检测一下靶蛋白,这里要特别注意了,很多实验室用western的一抗作为 ...
1.2Co-IP实验的步骤包括:(1)细胞裂解和共沉淀:将目标蛋白质所在的细胞或组织进行裂解,释放出蛋白质复合物。通过特异性抗体将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质共沉淀,形成复合物。(2)洗涤和离心:通过一系列洗涤步骤,去除非特异性结合的蛋白质,将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质保留在沉淀物中。离心沉淀物,...
一、co-IP 实验成功的评判标准是什么?所有的Input都有目的条带,IP后阴性对照无目的条带,互作组有或者无目的条带说明co-IP成功。IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准,因为这取决于目的蛋白本身所具有的互作蛋白数量、结合力强弱等方面。二、co-IP实验成败的主要因素有哪些?1.所使用的...
| GST-PULL DOWN(非生理条件下的验证,仅是体外验证,);如果想进一步确定结果,可以做CO-IP,(生理条件下的验证,结果比较可靠)。GST pull down 和 Co-IP关系问题简单通俗的打个比方, GST pull down 就像把一男一女放在孤岛上, 同类男女之间该发生的一般都会发生. 这种关系是直接的....
CO-IP可以分为在目的细胞中的内源性IP和在工具细胞系(一般为293T)的外源性CO-IP。而GST-Pull down可作为在原核生物中表达的蛋白,已经完全脱离了细胞环境,只有真正有相互作用的蛋白才能被拉下来。 免疫共沉淀 …