以实验室运用HPLC-SEC-FLD，即结合高效液相色谱(HPLC)、大小排除色谱(SEC)和荧光检测器(FLD)的分析技术，检测蛋白残留方法为例，方法分离和表征大分子或复杂样品中的成分，具有高灵敏度和高准确性，能够有效分离不同体积分子的蛋白质，并通过荧光信号检测特定的荧光基团。体积排阻色谱填料的孔径和样品分子的大小和分布...
SEC-HPLC的色谱柱通常采用颗粒尺寸均一、孔径分布狭窄的凝胶作为固定相。常用的凝胶材料包括琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺等。这些凝胶孔径大小在分子筛分布图上呈现出高斯分布。通过控制凝胶的孔径,可以实现对样品分子大小的有效分离。 在SEC-HPLC中,流动相通常是无机缓冲液,如磷酸盐缓冲液或甲醇/水溶液。流动相的选择...
以实验室运用HPLC-SEC-FLD,即结合高效液相色谱(HPLC)、大小排除色谱(SEC)和荧光检测器(FLD)的分析技术,检测蛋白残留方法为例,方法分离和表征大分子或复杂样品中的成分,具有高灵敏度和高准确性,能够有效分离不同体积分子的蛋白质,并通过荧光信号检测特定的荧光基团。 体积排阻色谱填料的孔径和样品分子的大小和分布相...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用，导致峰展宽...
SEC-HPLC是一种基于蛋白质分子大小的分离技术。它利用一个多孔的凝胶柱,较大的蛋白质分子无法进入凝胶内部,因此会在柱上流动速度较快,而较小的杂质分子则能进入凝胶内部,流动速度较慢。通过监测流出柱的吸光度信号,可以得到蛋白质样品的分子大小分布情况,从而评估样品的纯度。 2、准备工作 首先,需要准备好SEC-HPLC...
四、HPLC纯度检测样本准备(SEC-HPLC) 1.系统平衡 缓冲液选择:选择与样品缓冲液相匹配的洗脱液,确保样品在分析过程中保持稳定。 系统预热:将SEC-HPLC系统预热至设定温度,以确保分析过程中温度的一致性。 平衡色谱柱:用洗脱液通过色谱柱,直到基线稳定,确保色谱柱内填料完全湿润并达到平衡状态。
HPLC-SEC分析是确定治疗性蛋白质纯度的重要工具,并且在全世界范围内用作测量聚合物含量和污染物百分比(单克隆抗体制造过程)的标准方法。 鉴于蛋白质的完整性——在这种情况下,单克隆抗体由于温度变化、机械应力影响、pH波动和生产过程中以及整个生命周期中的紫外线照射的影响而受到威胁,因此,建立确定单克隆抗体纯度的可...
SEC-HPLC主要用于分离溶液中的大分子,如蛋白质、多肽、聚合物等,其原理是根据分子的尺寸在柱中进行排阻分离。 排阻极限与SEC柱的孔径大小有关。通常,SEC柱的孔径越小,其排阻极限也就越小。排阻极限是通过校准柱进行评估的,该柱上有一系列已知分子尺寸的标准物质,通过测定它们的保留时间来确定排阻极限。 在SEC-...
HPLC-SEC分析是确定治疗性蛋白质纯度的重要工具,并且在全世界范围内用作测量聚合物含量和污染物百分比(单克隆抗体制造过程)的标准方法。 鉴于蛋白质的完整性——在这种情况下,单克隆抗体由于温度变化、机械应力影响、pH波动和生产过程中以及整个生命周期中的紫外线照射的影响而受到威胁(另见[3]),因此,建立确定单克隆...
HPLC-SEC检测原理及蛋白残留检测相关应用 体积排阻色谱法(SizeExclusionChromatography,SEC)是一种基于分子尺寸差异的液相色谱技术。其核心原理是利用多孔凝胶固定相的孔径分布,通过分子在溶液中的流体力学体积(而非绝对分子量)实现分离,可以快速地确定样品混合物的复杂性,给出各个组分的大概分子量及分布。