HPLC RP法的操作步骤如下: 1. 准备样品溶液:将待测样品溶解于适当的溶剂中,并通过滤膜过滤以去除固体颗粒。 2. 准备流动相:根据样品性质和分离要求,选择合适的流动相组成,并进行气泡去除。 3. 设置仪器参数:根据样品性质和柱特性,设置合适的流速、柱温和检测器参数。 4. 进样:将样品溶液注入进样器中,控制注...
HPLC RP法是基于样品与固定相之间的亲疏水性相互作用来进行物质分离的。常用的固定相是疏水性的烷基链,如C18。当样品溶液通过固定相时,极性物质会与固定相表面发生亲和作用,从而被滞留,而非极性物质则会较快地通过。通过调节流动相的成分和流速,可以实现对不同化合物的分离。 二、操作步骤 1. 样品制备:将待测物...
方法:血清采用二氯甲烷液-液萃取法处理后以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法进样测定,色谱柱为Kromasil 100-C18,流动相为水相(由0.5%三氟乙酸与14 mmol/L甲酸铵溶液按2 ∶ 1体积比混合)-乙腈(76 ∶ 24,V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为常温,紫外检测波长为215 nm。结果:MHD、LTG、PBB和OXC血药浓度分别在0.40...
RP-HPLC的应用 | 多肽的分析与纯化⑤ 多肽和蛋白质的反相色谱(RP-HPLC)分析法需要“离子对试剂”。 在流动相中加入离子对试剂,以实现良好的峰形。 目前认为,在没有离子对试剂的情况下,硅胶表面的金属杂质是导致蛋白质/多肽峰形较差的原因。 三氟乙酸 三氟乙酸(TFA)是最常用的离子对试剂。将浓度为~0.1%的三...
实验室对于蛋白质的定量测定有多种方法,如考马斯亮蓝法(Bradford)、福林酚法(Lowry)、凝胶过滤法、质谱法(MS)等,除这些方法外,实验室还可以利用RP-HPLC反相高效液相色谱对蛋白质杂质进行检测。 反相高效液相色谱RP-HPLC由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系,基于溶质在固定相和流动相之间的相互作用,是...
论文标题: RP-HPLC法同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的含量 英文标题: 中文摘要: 目的:建立同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.8 ml/min,检测波长为334 nm,...
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）使用亲水性的固定相和疏水性的移动相，利用样品分子在移动相和固定相之间的互作用力差异进行分离。一、基本原理：1.疏水性固定相：反相色谱柱通常使用疏水性的固定相材料，如疏水链状碳氢化合物改性的硅胶或封闭的C18链，使分析物在移动相中具有亲水性，与固定相表面发生疏水...
反相高效液相色谱RP-HPLC检测蛋白质杂质 蛋白质杂质是一个普遍且相对复杂的生产问题,在生产过程中分辨所有蛋白杂质难度非常大,但为增加产品安全性,又必须对杂蛋白等进行分析和控制。实验室对于蛋白质的定量测定有多种方法,如考马斯亮蓝法(Bradford)、福林酚法(Lowry)、凝胶过滤法、质谱法(MS)等,除这些方法外,实验...
实验室对于蛋白质的定量测定有多种方法,如考马斯亮蓝法(Bradford)、福林酚法(Lowry)、凝胶过滤法、质谱法(MS)等,除这些方法外,实验室还可以利用RP-HPLC反相高效液相色谱对蛋白质杂质进行检测。 反相高效液相色谱RP-HPLC由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系,基于溶质在固定相和流动相之间的相互作用,是...
RP-HPLC是HPLC的一个部分。只不过占有比例较大。色谱：色谱又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法，它利用不同溶质（样品）与固定相和流动相之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次平衡，使各溶质达到相互分离。