Advanced Biotechnology (2025) 3:2 https://doi.org/10.1007/s44307-024-00053-5 ARTICLE Open Access Therapeutic gene correction of HBB frameshift CD41‑42 (‑TCTT) deletion in human hematopoietic stem cells Qianyi Liu1†, Xinyu Li2†, Hui Xu3†, Ying Luo3, Lin Cheng...
该单链核苷酸中,cd41-42(-cttt)突变位点位于中间,左侧同源臂片段52bp和右侧同源臂片段48bp,总共100bp。 43.具体地,利用含有hbb基因cd41-42(-cttt)突变位点的单链核苷酸对细胞基因组dna直接进行同源重组修复,减少了构建载体的步骤,提高了生产效率,降低了生产成本。采用此方法能够快速获得纯合的含有hbb基因cd41-42(...
结果显示:209例样本中共发现9个变异位点,按频率由高到低分别是CD2 T>C(50.72%),CD26 G>A(35.41%),CD17 A>T(12.92%),IVS-Ⅱ-17 C>A(12.44%),IVS-Ⅱ-16 G>C(11.96%).IVS-Ⅰ-30A>G(9.57%).CD6T>A (9.09%),CD41-42 (-TCTT)(7.18%)和CD5 T>A(1.92%),有157人检测出基因变异位点,占总...
该HBB基因突变细胞的制备方法包括以下步骤:使用RNP复合体靶向切割红系细胞的基因组DNA的HBB基因,RNP复合体包括Cas9蛋白与核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的sgRNA;及使用含有HBB基因CD41‑42‑CTTT突变位点的单链核苷酸对上述靶向切割后的红系细胞的基因组DNA进行同源重组修复,制备HBB基因突变细胞。上述HBB基因突变细胞,能够...
方案一:grna1、grna2和spcas9-2.0的mrna电转(electroporation)进入含血红蛋白hbb突变基因的cd34+细胞;细胞以stemspan基础培养基培养1天后,以raav-hbb(含修复hbbcd41/42delcttt序列的ssdna)转染cd34+细胞,细胞以添加有生长因子的stemspan培养基培养,每2天计数和添加培养基维持cd34+细胞浓度在1×106cells/ml;10天后,...
50℃ ꎬ15 minꎬ 构建重组载体 pGH~LA~RAꎬ 测序序列完全正确后ꎬ大量提取无内毒素质粒备用ꎮ 以 hHBB ( CD41 / 42ꎬ~CTTT) ~T 质粒为模板ꎬ分 别扩增两 个片段ꎬ 反应的引物序列见表 4ꎮ hHBB ( CD41 / 42ꎬ~CTTT ) 片段扩增反应体系: DNA 782 中国实验动物学报 2020 ...
[0012]1、 本发明制备了一种检测HBB/GJB2/ATP7B/PAH遗传病基因的阳性质控品, 由突变阳性质粒、 野生型人类基因组DNA和NF-H2O组成; 突变阳性质粒中包含插入了HBB_CD41-42、GJB2_235delC、 ATP7B_2333G>T、 PAH_728G>A四种突变基因片段的人工合成的DNA序列; 且突变阳性质粒与野生型人类基因组DNA按拷贝数以...
B地贫基因突变指的就是β-地贫缺陷基因,简称β-地中海贫血、地贫。β-地中海贫血,是不少家长闻之色变的一种常见的遗传性疾病,在两广地区尤其高发。目前,临床上根治地贫的唯一的方法,就是造血干细胞(HSCs)异体移植。然而,地贫患者找到相匹配的脊髓捐赠者的几率极低,因此,大多数患者只能靠不断...
CD41/42(- TCTT)、CD43(G-T)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G-T, G-A)、IVS-I-5(G-C)和IVS-II-654(C-T)。 [0005]采用分子诊断方法可以有效地检测HBA1/2和HBB基因区域的突变。跨越断裂点PCR 4 4 CN112080558A说明书2/15页 (Gap-PCR)法可以检测HBA1/2基因缺失型突变,但是无法检测非缺失型突变。
目前检测HBB基因的点突变、小的缺失或插入最常用的方法是反向点杂交,基于此方法的商业化β地中海贫血基因检测试剂盒大多检测8个常见突变位点和9个少见突变位点,8个常见突变位点是-28(A-G)、-29(A-G)、CD17(A-T)、βE(CD26G-A)、CD41-42(-TCTT)、CD43(G-T)、CD71-72(+A)和IVS-II-654(C-T),9...