GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两...
GSTpulldownassay GSTpulldownassay GST pull-down assay ⽩、表达系统以及体外转录翻译系统等⽅法获得。此⽅法简单易⾏,操作⽅便。GST 和免疫共沉淀的区别 GST pull-down⼀般指⽤⼀个带GST tag的重组蛋⽩,与⽬的蛋⽩进⾏孵育,最后⽤结合GST的Beads拉下相互作⽤复合物。co-IP⼀般是...
GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两种蛋白...
区别是pull-down一般是验证 体外 相互作用;免疫共沉淀一般用于检测细胞水平的 体内 相互作用。
GST Pull Down AssayGST Pull Down(A/BB拉A) 1.转染获取目的蛋白A。 2.转化(BL21),挑单克隆,诱导GST、GST-B蛋白表达,超声裂解。 3.Buffer A洗Ni柱与GST Beads,离心(4℃,1000rpm,1min),弃上清,相应加入A(500ul)、GST(200ul)与GST-B(100ul)裂解液,Buffer A补齐至500ul。 4.置于4℃垂直混悬仪上...
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实验目的:体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用,或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合...
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