GST pull down是一种常用的蛋白与蛋白互作实验方法,利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白(最常用的是GST标签,即谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione S-transferase),诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂,当目的蛋白溶液过柱时,将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用,或者...
GST Pull down实验方法如下: 一、GST-a融合蛋白的表达 1.将目的蛋白与GST的重组质粒转化到BL21菌株中; 2.挑取单克隆到含有5 ml LB培养基(加入5 μl氨苄)的10 ml试管里,37℃恒温振荡培养箱中培养过夜; 3.将培养菌液转移到含有500 ml LB(含500 μl氨苄)的1L锥形瓶中,37℃,200 rpm培养数小时; 4.测定...
GST Pull down实验方法如下: 一、GST-a融合蛋白的表达 1.将目的蛋白与GST的重组质粒转化到BL21菌株中; 2.挑取单克隆到含有5 ml LB培养基(加入5 μl氨苄)的10 ml试管里,37℃恒温振荡培养箱中培养过夜; 3.将培养菌液转移到含有500 ml LB(含500 μl氨苄)的1L锥形瓶中,37℃,200 rpm培养数小时; 4.测定...
gst pull-down实验流程:提取并测定蛋白浓度,检测诱饵及猎物蛋白表达,准备磁珠并分别加入实验组和对照组,结合诱饵蛋白并洗涤,再结合互作蛋白并洗涤,最后洗脱并进行后续检测。©2022 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | 网站地图 | 百度营销 ...
其中,GST Pull-Down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是表达有GST(非诱饵融合蛋白)的分别转化细胞裂解物,也可以是将GST加到非转化细胞的裂解物中。
GST-Pull Down作为体外检测蛋白间直接互做的行之有效的方法,可用于证实预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在,也可用作未知的蛋白质-蛋白质相互作用的初始筛选测定法。(服务请咨询) GST-Pull Down的原理 GST Pull-Down实验基于GST(glutathione-S-transferase),即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结...
通过GST pull down实验，研究人员能深入探究蛋白质之间的相互作用，有助于理解疾病发生机制，并为药物研发提供重要参考。原理简介 实验流程包括蛋白提取、浓度测定、诱饵蛋白结合、目标蛋白结合、洗脱、后续检测等步骤。其核心在于利用带有GST标签的诱饵蛋白捕获目标蛋白复合物，通过分析复合物来探究相互作用。样...
6、通过SDS-PAGE和Western blot进行检测。 好啦,那关于GST pulldown实验步骤就分享完啦,如果您也在设计GST pull down实验的话可以留言给我们跟技术一起讨论设计出最好的实验方案哦~如果您觉得实验让您头疼的话也可以把GST pull down实验外包给我们,实验交给我,思考留给您~...
GST-Pull Down 作为体外检测蛋白间直接互做的行之有效的方法，可用于证实预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在，也可用作未知的蛋白质-蛋白质相互作用的初始筛选测定法。（服务请咨询） GST-Pull Down的原理 GST Pull-Down实验基于GST（glutathione-S-transferase），即谷胱甘肽-S-转移...
GST pull-down是体外检测蛋白之间相互作用行之有效的实验方法,可用于验证两种已知蛋白可能存在的直接互作关系(GST pull-down+Western blot);另外,还可以用于寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白(GST pull-down+LC-MS)。 三、实验流程 GST-A融合蛋白的表达 1. 将目的蛋白与GST重组的质粒转入 BL21菌株中;...