GST pull-down:原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明。Co-IP实验:细胞内高表达目的蛋白,并通过IgG球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。太太太详细了!Co-IP实验全流程标准实操、结果解读及实验问题解决 (...
实验结果 实验组GST-pull down第三列的实验结果可以看出KU-HIS，GST的条带中只检测到了GST，说明KU-HIS没有连接到亲和纯化柱上而被洗脱掉了。而在第四列的实验结果可以分别检测到GST与HIS 标签说明KU与TOP6发生了相互作用使得在条带中分别检测到了GST与HIS标签。
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...
GST pull down实验结果怎么看啊 这张图的主要目的是为了证明GST-Atrogin-1-wt(野生型)和β-catenin在体外的相互作用, 上图是考马斯亮蓝染色的图,看划线的解说,说明实验中是用GST bead与纯化的GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt共同孵育,用孵育后的bead来拉裂解液中的β-catenin 下图免疫印迹的,也就是western blot的...
综合而言,GST pull-down实验和CoIP实验其实是相互补充的两种实验方法,通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 对于很多文献中 CoIP和 GST pull-down实验结果图,许多刚踏入科研领域的小伙伴可能不是很熟悉,看不大明白。今天咱们就根据文献案例来具体展示一下两种实验结果的分析过程。
GST pulldown实验是一种常用的蛋白质相互作用分析方法,通过将GST标签融合蛋白与目标蛋白质进行结合,并利用GST标签进行纯化,最终检测目标蛋白质与与其相互作用的蛋白质的存在和互作关系。在进行GST pulldown实验后,需要对实验结果进行分析,以确定目标蛋白和与其相互作用的蛋白的存在和互作关系。
综合而言,GST pull-down实验和CoIP实验其实是相互补充的两种实验方法,通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 对于很多文献中CoIP和GST pull-down实验结果图,许多刚踏入科研领域的小伙伴可能不是很熟悉,看不大明白。今天咱们就根据文献案例来具体展示一下两种实验结果的分析过程。
4️⃣ GST pull-down 验证与结果分析GST pull-down实验经过考马斯亮蓝和Western blot检测后即可进行结果分析。考马斯亮蓝检测:通过考染胶中纯化条带区别于未纯化样品条带的分布情况,可以明显看出纯化后的探针蛋白A,在实验组与对照组中都有分布;下面与蛋白A互作的未知蛋白在实验组中存在,在对照组中不存在,证明...
实验步骤：① 获得带有 GST 标签的融合蛋白；② 将带有 GST 标签的融合蛋白亲和到谷胱甘肽层析柱上；③ 获取可能与融合蛋白发生相互作用的蛋白；④ 与融合蛋白发生相互作用的蛋白被亲和到谷胱甘肽层析柱上；⑤ 切掉标签，洗脱得到相互作用的蛋白。影响GST pull down实验结果的因素 1、 载体选择 对于不同的实验需要构建...