Western blot检测:探针蛋白A明显存在于Input组和实验组中,并且阴性组中没有,证明实验体系洗脱充分有效;下面出现的互作的未知蛋白在Input组和实验组中有明显条带,且在阴性组中没有条带,证明实验结果准确可靠。 5、GST pull down实验对照与结果解读实例 ①GST pull-down实验对照设置 Input 证明样品中加入了对应的蛋白...
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...
实验结果 实验组GST-pull down第三列的实验结果可以看出KU-HIS，GST的条带中只检测到了GST，说明KU-HIS没有连接到亲和纯化柱上而被洗脱掉了。而在第四列的实验结果可以分别检测到GST与HIS 标签说明KU与TOP6发生了相互作用使得在条带中分别检测到了GST与HIS标签。
GST pull down实验结果怎么看啊 这张图的主要目的是为了证明GST-Atrogin-1-wt(野生型)和β-catenin在体外的相互作用, 上图是考马斯亮蓝染色的图,看划线的解说,说明实验中是用GST bead与纯化的GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt共同孵育,用孵育后的bead来拉裂解液中的β-catenin 下图免疫印迹的,也就是western blot的...
GST pulldown实验是一种常用的蛋白质相互作用分析方法,通过将GST标签融合蛋白与目标蛋白质进行结合,并利用GST标签进行纯化,最终检测目标蛋白质与与其相互作用的蛋白质的存在和互作关系。在进行GST pulldown实验后,需要对实验结果进行分析,以确定目标蛋白和与其相互作用的蛋白的存在和互作关系。
综合而言,GST pull-down实验和CoIP实验其实是相互补充的两种实验方法,通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 对于很多文献中 CoIP和 GST pull-down实验结果图,许多刚踏入科研领域的小伙伴可能不是很熟悉,看不大明白。今天咱们就根据文献案例来具体展示一下两种实验结果的分析过程。
【一次搞懂pull down 实验(上)】本视频用钓鱼来比喻实验原理,以动画的形式生动形象的进行讲解,特别适合初学pull down 实验的同学,快来学习吧。 790 -- 10:16 App 详解|关于DNA pull down实验,你想知道的这里都有(三) 2171 -- 5:27 App 一次搞懂pull down 实验(下),本视频以动画的形式展示pull down 实...
4️⃣ GST pull-down 验证与结果分析GST pull-down实验经过考马斯亮蓝和Western blot检测后即可进行结果分析。考马斯亮蓝检测:通过考染胶中纯化条带区别于未纯化样品条带的分布情况,可以明显看出纯化后的探针蛋白A,在实验组与对照组中都有分布;下面与蛋白A互作的未知蛋白在实验组中存在,在对照组中不存在,证明...
GST Pull down实验方法如下: 一、GST-a融合蛋白的表达 1.将目的蛋白与GST的重组质粒转化到BL21菌株中; 2.挑取单克隆到含有5 ml LB培养基(加入5 μl氨苄)的10 ml试管里,37℃恒温振荡培养箱中培养过夜; 3.将培养菌液转移到含有500 ml LB(含500 μl氨苄)的1L锥形瓶中,37℃,200 rpm培养数小时; ...