GST-pulldown操作说明 GST Pulldown（研究GST-CDC-48与Rpn11相互作用）1、取两只1.5mL EP管，标记为实验组和对照组，并向每支管中分别加入25μL GST-beeds 20%乙醇充分混合液。2、加入Wash buffer 1 洗涤两次，每次500μL，5000rpm，4℃离心30s去除上清液。Wash buffer 配比如下：Tris-HCL 50 mM NaCL 100...
3) 置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 4) 加入预冷的500μL Wash buffer, 4℃垂直混匀器上摇动 5min洗涤,置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 5) 重复上上步骤2次,即共洗涤3次; 5、 GST-pulldown 1) 分别向步骤 4获得的GST-P53及GST管中加入300μL捕获蛋白裂解液; 2) 4℃,垂直混匀器上翻...
GSTPulldown(研究GST-CDC-48与Rpn11相互作用) 1、取两只1.5mLEP管,标记为实验组和对照组,并向每支管中分别加入25μL GST-beeds20%乙醇充分混合液。 2、加入Washbuffer1洗涤两次,每次500μL,5000rpm,4℃离心30s去除上 清液。Washbuffer配比如下: Tris-HCL50mM NaCL100mM TritonX1000.1% DTT1mM pH7.5 注意...
4)加入预冷的500μLWash buffer, 4℃垂直混匀器上摇动 5min洗涤,置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 5)重复上上步骤2次,即共洗涤3次; 5、GST-pulldown 1)分别向步骤4获得的GST-P53及GST管中加入300μL捕获蛋白裂解液; 2)4℃,垂直混匀器上翻转孵育过夜; 3)置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; ...
用Wash buffer 2 5ml每次,洗2次(小量是1ml洗) 收集洗脱液 电泳检测每种wash buffer 的最佳用量(防止将蛋白洗脱) 10、用Elution buffer洗脱蛋白2-4次,每次0.5ml,取1ul洗脱液在NC 膜上,丽春红染色,颜色越深,蛋白量越大,取蛋白量最大的做Pull down Lysis buffer 50mM NaH2PO4,PH8.0 300mM Nacl 10mMImidazo...
PULL-01Binding Buffer for pull-down50 mL+4 °C PULL-02Wash Buffer for pull-down120 mL+4 °C PULL-03Elution Bufferforpull-down100 mL+4 °C非变性洗脱液,用于衔接下游WB及MS PULL-04TCEP250mg+4 °C 下列组分收到后需储存在室温中
1、GST pull-down原理原理: GST pull down 是一种在体外研究蛋白质相互作用是一种在体外研究蛋白质相互作用的方法。的方法。 原理:原理: 利用DNA重组技术将已知蛋白与GST (Glutathione S transferase) 融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱...
GST pull down操作流程 GST pull down操作流程 一、表达GST融合蛋白 1、6mlLB＋单克隆＋Amp，37℃，250rmp培养过夜 2、5ml菌液加入400ml LB＋Amp的1L锥形瓶中中，37℃，250rmp，2h，OD600≈0.6-0.8 3、取1ml菌液保存于Ep管中，sample1 4、大瓶加入400ul（1：1000）IPTG，4h 5、取1ml菌液保存于Ep...
Pierce™ GST 蛋白相互作用 Pull-Down 试剂盒 证书 Thermo Scientific™ Pierce™ GST 蛋白相互作用 Pull-Down 试剂盒 Thermo Fisher Scientific Pierce GST 标签蛋白相互作用沉降试剂盒包含捕获并纯化与 GST 标签融合蛋白相互作用的蛋白所需的组分。GST 标签蛋白相互作用沉降试剂盒的特点:•GST了解更多信息...
(6)加入60μl Elution buffer,不必吹打,晃动洗脱蛋白。离心3krpmx5min,吸净上清,pET融合蛋即在上清中。 (7)如果用于检测,取1～2μl样品,配成15～20μl 1×蛋白电泳上样缓冲液,在沸水浴中煮3min。离心12krpm×1min,取上清作SDS-PAGE电泳。 (8)如果用于pull down测试,参见pull down 步骤。 GST pull down...