4)加入预冷的500μLWash buffer, 4℃垂直混匀器上摇动 5min洗涤,置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 5)重复上上步骤2次,即共洗涤3次; 5、GST-pulldown 1)分别向步骤4获得的GST-P53及GST管中加入300μL捕获蛋白裂解液; 2)4℃,垂直混匀器上翻转孵育过夜; 3)置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; ...
GST-pulldown操作说明 GST Pulldown（研究GST-CDC-48与Rpn11相互作用）1、取两只1.5mL EP管，标记为实验组和对照组，并向每支管中分别加入25μL GST-beeds 20%乙醇充分混合液。2、加入Wash buffer 1 洗涤两次，每次500μL，5000rpm，4℃离心30s去除上清液。Wash buffer 配比如下：Tris-HCL 50 mM NaCL 100...
3) 置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 4) 加入预冷的500μL Wash buffer, 4℃垂直混匀器上摇动 5min洗涤,置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 5) 重复上上步骤2次,即共洗涤3次; 5、 GST-pulldown 1) 分别向步骤 4获得的GST-P53及GST管中加入300μL捕获蛋白裂解液; 2) 4℃,垂直混匀器上翻...
1、GST pull-down原理原理: GST pull down 是一种在体外研究蛋白质相互作用是一种在体外研究蛋白质相互作用的方法。的方法。 原理:原理: 利用DNA重组技术将已知蛋白与GST (Glutathione S transferase) 融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱...
15)加预冷的wash buffer 2 0.5ml至microspin，4℃ 1000g离心10 sec，弃收集管中的液体，重复清洗6次。16)预冷的wash buffer 3 0.5ml 重复清洗3次。17)最后一次离心，4℃ 10000g离心30 sec。18)加入适量合适分析的1×leammli buffer，煮沸5min洗脱蛋白。19)18×16cm SDS-PAGE分析，质谱鉴定蛋白。Wash ...
5、 GST-pulldown 1) 分别向步骤 4获得的GST-P53及GST管中加入300μL捕获蛋白裂解液; 2) 4℃,垂直混匀器上翻转孵育过夜; 3) 置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 4) 磁珠加入预冷的500μL Wash buffer,随后 4℃颠倒混匀5min,置于磁力架上静置3min,待澄清后弃上清; 5) 重复上步骤4次,即共洗涤5...
10、用Elution buffer洗脱蛋白2-4次,每次0.5ml,取1ul洗脱液在NC膜上,丽春红染色,颜色越深,蛋白量越大,取蛋白量最大的做Pull down Lysis buffer 50mM NaH2PO4,PH8.0 300mM Nacl 10mMImidazole Wash buffer 1 50mM NaH2PO4,PH8.0 300mM Nacl 20mM Imidazole Wash buffer 2 50mM NaH2PO4,PH8.0 300mM Nacl ...
1、GST pull-down:是利用重组技术将探针蛋白与 GST 谷胱苷肽巯基转移酶融合,融合蛋白通过 GST 与固相化在球珠上的 GSH 谷胱甘肽结合。从而分离出能与融合蛋白相互作用的蛋白的技术。 2、GST pull-down 研究对象 二、GST pull-down 原理 ...
PULL-01Binding Buffer for pull-down50 mL+4 °C PULL-02Wash Buffer for pull-down120 mL+4 °C PULL-03Elution Bufferforpull-down100 mL+4 °C非变性洗脱液,用于衔接下游WB及MS PULL-04TCEP250mg+4 °C 下列组分收到后需储存在室温中
GSTPulldown(研究GST-CDC-48与Rpn11相互作用) 1、取两只1.5mLEP管,标记为实验组和对照组,并向每支管中分别加入25μL GST-beeds20%乙醇充分混合液。 2、加入Washbuffer1洗涤两次,每次500μL,5000rpm,4℃离心30s去除上 清液。Washbuffer配比如下: