GST,全称为glutathione-S-transferase,即为谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(glutathione,GSH)结合,其与CoIP实验都是验证蛋白互作的有效方法。 GST pull-down和与CoIP的区别GST pull-down:原核纯化蛋…
一、实验目的:构建GST-P53融合表达载体,并过表达此蛋白。通过GST-pull down 沉淀细胞中与P53蛋白互作的其他蛋白,并通过WB鉴定P53与HSP70是否互作。 二、实验材料 l 主要试剂 l 主要仪器及器材 三、 实验方法 1、 捕获蛋白制备 1) 收集的细胞中加入1mL 预冷的PBS; 吹打混匀后,1500g 离心 5 min,去除上清,再...
1. WB验证抗体质量(质控1) 例如: 结果说明:WB检测目的样本中有目的蛋白的信号。 2.Pull down-WB检测 例如: 结果说明:SPX4与PHR2在体外相互作用的pull-down实验。在大肠杆菌中表达并纯化PHR2-His、GST-SPX4和GST,并进行GST拉下实验。分别用GST和His抗体免疫印迹法检测GST/GST-SPX4和PHR2-His蛋白 七、质谱...
GST pull-down+YFP IB组:表示GST pull-down实验后用YFP进行免疫印迹。发现GST + NSm21-YFP组和GST-Sw-5b + YFP组无条带,表明GST pull-down体系中的GST与NSm21-YFP,GST-Sw-5b与YFP组分之间无互作,是阴性对照组。GST-Sw-5b + NSm21-YFP组有条带,表明两种物质之间存在互作,结合阴性对照组结果证明是Sw-...
文献案例1:Co-IP&GST pull down结果分析 Input:全细胞裂解液,诱饵蛋白与靶蛋白表达的检测确认。含有细胞内所有的蛋白,可认为是阳性对照。也就是处理完样本得到的细胞裂解液,在做IP实验之前,需要先跑WB,确认样本中含有蛋白A和蛋白B。 IP:全称immunoprecipitation,即免疫沉淀,这一步主要是为了纯化富集目的蛋白。
从两者的实验原理我们不难发现,gst pull-down和coip实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度...
可以看见GST pull-down实验结果图,与CoIP实验非常类似,主要也分为两部分: Input部分检测未经过GST pull-down处理的样本,也是一种阳性对照。Input部分有三张WB结果: GAPDH代表以GAPDH抗体(anti-GAPDH)检测样本中GAPDH蛋白水平(GAPDH和Tubulin一样,都是...
1.GST pull-down操作 · 结合诱饵蛋白与捕获蛋白裂解液 · 洗涤和裂解磁珠上的蛋白复合物 · 收集上清以进行后续分析 2.银染与WB结果 · 详细银染步骤，从固定到最后的水洗涤 · 对银染和WB结果的描述和分析 实验原理 GST pull-down实验基于亲和层析的原理，通过GST融合蛋白与GSH磁珠的结合，实现与目标蛋白的物理...
证明2种已知蛋白间可能存在的相互作用通常采用GST pull down+WB；寻找与已知蛋白发生相互作用的未知蛋白通常采用GST+MS。蛋白表达预测常用网站 1、蛋白表达之---跨膜区预测http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/TMHMM是由丹麦理工大学生物序列分析中心CBS负责维护。TMHMM使用了最xian进的复杂的隐马尔可夫模型Hidden ...
本笔记详细记录了GST pull-down实验的每一步,该实验旨在探究GST融合蛋白(GST-P53)与细胞内其他蛋白(如HSP70)的潜在互作。 实验目的 明确构建GST-P53融合蛋白表达载体的目的,并利用GST pull-down技术沉淀与P53蛋白互作的蛋白,通过Western Blot(WB)验证P53与HSP70的潜在互作。