1. WB验证抗体质量(质控1) 例如: 结果说明:WB检测目的样本中有目的蛋白的信号。 2.Pull down-WB检测 例如: 结果说明:SPX4与PHR2在体外相互作用的pull-down实验。在大肠杆菌中表达并纯化PHR2-His、GST-SPX4和GST,并进行GST拉下实验。分别用GST和His抗体免疫印迹法检测GST/GST-SPX4和PHR2-His蛋白 七、质谱...
GST pull-down 是两种蛋白在试管内(细胞以外)发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可,验证蛋白之间直接的相互作用。 Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白,并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。 GST pull-down 实验优点:可验证蛋白质-...
GST pull-down * 样本要求 样本类型 GST pull down WB建议送样量 GST pull down MS建议送样量 动物细胞 3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿) 5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿) 动物组织 1g/组 2g/组 植物叶片 2g/组 4g/组 植物根或果实 4g/组 8g/组 菌体 50ul菌体沉淀/组 100ul菌体沉淀/组 ▲注意...
GST蛋白相互作用pull down案例分析 蛋白A-GST和蛋白B-his、蛋白C-GST和蛋白D-his进行GST Pull-Down实验,来验证蛋白A-GST和蛋白B-his、蛋白C-GST和蛋白D-his是否具有相互作用。GST蛋白作为阴性对照。 实验具体分组可参考如下: 表一 表二 将Input组各样品与GST Magarose Beads反应后,用洗脱液洗脱后,进行WB鉴定,...
一、实验目的:构建GST-P53融合表达载体,并过表达此蛋白。通过GST-pull down沉淀细胞中与P53蛋白互作的其他蛋白,并通过WB鉴定P53与HSP70是否互作。 二、实验材料 l主要试剂 l主要仪器及器材 三、实验方法 1、捕获蛋白制备 1)收集的细胞中加入1mL预冷的PBS;吹打混匀后,1500g 离心 5 min,去除上清,再重复洗涤细胞...
一、实验目的:构建GST-P53融合表达载体,并过表达此蛋白。通过GST-pull down 沉淀细胞中与P53蛋白互作的其他蛋白,并通过WB鉴定P53与HSP70是否互作。 二、实验材料 l 主要试剂 l 主要仪器及器材 三、 实验方法 1、 捕获蛋白制备 1) 收集的细胞中加入1mL 预冷的PBS; 吹打混匀后,1500g 离心 5 min,去除上清...
从两者的实验原理我们不难发现,gst pull-down和coip实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度...
1.GST pull-down操作 · 结合诱饵蛋白与捕获蛋白裂解液 · 洗涤和裂解磁珠上的蛋白复合物 · 收集上清以进行后续分析 2.银染与WB结果 · 详细银染步骤，从固定到最后的水洗涤 · 对银染和WB结果的描述和分析 实验原理 GST pull-down实验基于亲和层析的原理，通过GST融合蛋白与GSH磁珠的结合，实现与目标蛋白的物理...
GST Pull down实验方法如下: 一、GST-a融合蛋白的表达 1.将目的蛋白与GST的重组质粒转化到BL21菌株中; 2.挑取单克隆到含有5 ml LB培养基(加入5 μl氨苄)的10 ml试管里,37℃恒温振荡培养箱中培养过夜; 3.将培养菌液转移到含有500 ml LB(含500 μl氨苄)的1L锥形瓶中,37℃,200 rpm培养数小时; ...
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...