GST pull down是一种常用的蛋白与蛋白互作实验方法,利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白(最常用的是GST标签,即谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione S-transferase),诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂,当目的蛋白溶液过柱时,将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用,或者...
GST pull down+GST IB组:表示GST pull down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 6、...
结果说明:WB检测目的样本中有目的蛋白的信号。 2.Pull down-WB检测 例如: 结果说明:SPX4与PHR2在体外相互作用的pull-down实验。在大肠杆菌中表达并纯化PHR2-His、GST-SPX4和GST,并进行GST拉下实验。分别用GST和His抗体免疫印迹法检测GST/GST-SPX4和PHR2-His蛋白 七、质谱结果 1. 考染结果(质控2) 例如: ...
GST pull down+GST IB组:表示GST pull down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 6、...
一、GST pull down实验原理 GST pull down的主要原理是利用DNA重组技术将已知蛋白与GST融合，而融合蛋白通过GST与固化在载体上的GTH（谷胱甘肽）亲和结合。简单来说，我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作，将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋白以及能特异性结合GST的Sephrose 4B beads混合在一起孵育一定时间，然后洗去未...
GST pulldown技术优化与实验技巧原理介绍:GST pulldown实验广泛用于研究和鉴定蛋白质之间的相互作用,其原理基于谷胱甘肽-S-转移酶蛋白(glutathione-S-transferase,GST)与还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结…
GST pulldown原理原理: GST pull down 是一种在体外研究蛋白质相互作用是一种在体外研究蛋白质相互作用的方法。的方法。 原理:原理: 利用DNA重组技术将已知蛋白与GST Glutathione S transfera
GST标签蛋白和HIS标签蛋白的pulldown互作在生物学研究中,了解蛋白质之间的相互作用对于揭示生物体内信号传导、细胞周期调控等方面具有重要意义。GST标签蛋白和HIS标签蛋白的Pull-Down技术是一种常用的研究蛋白...
GST蛋白相互作用pull down案例分析 蛋白A-GST和蛋白B-his、蛋白C-GST和蛋白D-his进行GST Pull-Down实验,来验证蛋白A-GST和蛋白B-his、蛋白C-GST和蛋白D-his是否具有相互作用。GST蛋白作为阴性对照。 实验具体分组可参考如下: 表一 表二 将Input组各样品与GST Magarose Beads反应后,用洗脱液洗脱后,进行WB鉴定...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或...