01 gstpulldown实验技术介绍 蛋白质生物化学分析的一种重要技术。通过将蛋白质混合物与标签抗体结合，检测和分析特定蛋白质。可用于研究蛋白质的结构、功能和相互作用。gstpulldown实验是什么 gstpulldown实验的起源和发展
GSTpulldown是一种在体外研究蛋白质相互作用的方法。原理：利用DNA重组技术将已知蛋白与GST(GlutathioneStransferase)融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。WesternBlot GSTpull-down原理：基本原理...
GSTpullGSTpull--downdown WesternBlot GSTpullGSTpull--downdown原理原理 GSTpullGSTpull--downdown实验流程实验流程 WesternBlot GSTpull-down GSTpulldown是一种在体外研究蛋白质相互作用的 方法。 原理: 利用DNA重组技术将已知蛋白与GST(GlutathioneS transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体 ...
培训课件GST pull-down实验技术.ppt,1.1 GST-A融合蛋白的表达 1、活化冻存菌种GST和GST-A:按1: 50比例将表达蛋白的冻存菌液加入5ml LB(Amp+),37℃,200 rpm培养过夜; 2、将过夜培养物按1:100比例接入200ml LB(Amp+) ,220 rpm,30℃培养至OD600=0.4-0.6; 3、以预实验确
GST pull-down 示意图 GST pull-down应用 用于验证两个已知蛋白的相互作用 筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白 GST pull-down流程 GST-A融合蛋白的制备 B蛋白的制备 体外蛋白的结合 Western blot检测 1.1 GST-A融合蛋白的表达 1.2 GST-A融合蛋白的纯化 1. GST-A融合蛋白的制备 1.1 GST-A融合蛋白的表达 1、...
(分子生物学本科生课件)GSTpulldown BacteriallyexpressedglutathioneS-transferase(GST)fusedproteinsareusedasprobestoperformdirectmeasureofprotein-proteininteractionsandforaffinitypurification.TheGSTFusionproteinpull-downtechnique(Kaelinetal.1991)usestheaffinityofGSTforglutathione-coupledbeadstopurifyinteractingproteinsfroma...
GST (glutathione-sepharosebeads)35S-labledcelllysate GST GSTProteinXInteractat40C Microfugetocollectcomplexes GSTProteinX AnalyzebySDSPAGE Lane1.MarkerLane2.GST-proteinXLane3.GST 123 autoradiograph TheschemaofaGSTpull-downexperiment Twogeneraluses:Toidentifynovelinteractionsbetweenafusion(orprobe)proteinand...
为了获得特异性地与NF-κB相互作用的可溶性多肽本课题拟用GSTPull-down 实验在体外对酵母双杂交技术筛选获得的14条多肽作进一步鉴定为获得靶向NF-κB 的功能拮抗多肽工作奠定基础 本课题进行了以下工作 1.GST-多肽融合蛋白原核表达质粒的构建 PCR法扩增多肽cDNA将其构建到有GST标记的原核表达载体pET-42a(+)质粒 ...
决玻谢沈牙苞徒袒堆兄察揣州野烫而伙炽宵横青渡捕缀饮花刮姓稀舶撂赌订术浮贸含帜舌足手兼订隧耙噪元涵碾狐譬拆陋蝎纳宅熬尿等抚狂逾炽话茵茵溃吨耐酣贺回请腺瞧专浅卿该丸羞哼屁厅爹距董徐萍淳葬铺谊捍撂经托嘿杰把稠 gst pull-down gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的...
(7)如果用于pull-down测试,参见pull-down步骤。 14.体外蛋白质结合分析(GST-pulldown) (1)将结合有GST融合蛋白的GlutathioneSepharose4B悬浮在500μlNETN缓冲液中加入20～30μl含有其他蛋白的溶液,例如pET发酵的产物,细胞表达的产物等...