(2)用Ni-IDA Binding-Buffer冲洗层析柱,至流出液OD280值到达基线; (3)用Ni-IDA Washing-Buffer冲洗层析柱,至流出液OD280值到达基线; (4)用Ni-IDA ELution-Buffer洗脱目的蛋白,收集流出液; (5)收集的蛋白溶液加入透析袋中,使用Tris-HCl进行透析过夜; (6) 进行SDS-PAGE分析和WB分析。 3.GST-Pull Down实验 ...
GST pull-down 千呼万唤始出来,终于要见证两个蛋白的相爱了,好激动! 1.纯化好的 GAT-A beads 在使用前用冰 PBS 洗 3 遍,每遍 500 g/min,4 ℃ 离心 5 min。 2.加入适量的 His-B 纯化蛋白(作者君认为 10ug 的量做 pull-down 已经足够了),binding buffer 是 PBS。
(2)用Ni-IDA Binding-Buffer冲洗层析柱,至流出液OD280值到达基线; (3)用Ni-IDA Washing-Buffer冲洗层析柱,至流出液OD280值到达基线; (4)用Ni-IDA ELution-Buffer洗脱目的蛋白,收集流出液; (5)收集的蛋白溶液加入透析袋中,使用Tris-HCl进行透析过夜; (6)进行SDS-PAGE分析和WB分析。 3.GST-Pull Down实验 ...
首先简要介绍一下 GST pull-down 技术,高大上的说法是通过已经标记的 GST标签蛋白,从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白,用以确定已知蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系。 通俗地讲就是 GST 标签的 A 蛋白(GST-A)与另一标签的 B 蛋白(作者君用的是 His 标签纯化的体外蛋白 His-B)是否相...
上海复名医疗科技有限公司生产的蛋白互作GST Pull-Down试剂盒,品名:Smart-GST™GSTPull-DownKit,货号:IF9604,品牌:Engibody订购及技术咨询:朱小鸥,13817407320(微信同号)N
GST pull-down 千呼万唤始出来,终于要见证两个蛋白的相爱了,好激动! 1.纯化好的 GAT-A beads 在使用前用冰 PBS 洗 3 遍,每遍 500 g/min,4 ℃ 离心 5 min。 2.加入适量的 His-B 纯化蛋白(作者君认为 10ug 的量做 pull-down 已经足够了),binding buffer 是 PBS。
（4）用Ni-IDA ELution-Buffer洗脱目的蛋白，收集流出液;（5）收集的蛋白溶液加入透析袋中，使用Tris-HCl进行透析过夜;（6）进行SDS-PAGE分析和WB分析。3.GST-Pull Down实验 使用GST Protein Interaction Pull-Down Kit (购自Thermo公司)3.1平衡树脂（GST）(1)混匀Immobilized Glutathione，彻底重悬树脂...
Pull Down 实验流程 1. 混合两种预测相互作用的蛋白。(Protein-A-GST & Protein-B-HIS,下面实验用 GST 树脂 IP, 用 Western Blot 检测 HIS;反之亦然。如果是纯化后的蛋白,需要进行偷袭或者使用超滤离 心管为蛋白更换溶液,之后才能继续 Pull Down。) 2. 加入 1 mL Binding Buffer。 Binding Buffer:50 mM ...
Pull Down 实验流程 1. 混合两种预测相互作用的蛋白。(Protein-A-GST & Protein-B-HIS,下面实验用 GST 树脂 IP, 用 Western Blot 检测 HIS;反之亦然。如果是纯化后的蛋白,需要进行偷袭或者使用超滤离 心管为蛋白更换溶液,之后才能继续 Pull Down。) 2. 加入 1 mL Binding Buffer。 Binding Buffer:50 mM ...
蛋白互作GST Pull-Down试剂盒 英文名称: GST Pull-Down Kit 总访问: 73 国产/进口: 进口 半年访问: 73 产地/品牌: Engibody美国 产品类别: 细胞生物学试剂 规格: 24个反应 最后更新: 2024-9-26 货号: IF9604 CAS 号: 参考报价: 2500 立即询价 电话咨询 ...